实验五 氮磷钾对蔬菜生长和品质的影响（实验指导）.pdfVIP

实验五 氮磷钾对蔬菜生长和品质的影响 1、实验意义 蔬菜是人们日常生活中必不可少的重要食品，蔬菜易于积累硝酸盐，人体积 累的硝酸盐约80%来自于蔬菜，现代医学证明，在人体内，硝酸盐可被细菌还原 成亚硝酸盐，如果亚硝酸盐在人体内积累过多，一方面直接使人缺氧中毒，产生 高铁血红朊症；另一方面，在酸性条件下，亚硝酸盐可与次级胺形成亚硝胺。在 已发现的120 种亚硝胺化合物中，约75%的亚硝胺能诱发消化系统发生癌变。世 界卫生组织和联合国粮农组织（WHO/FAO ，1973）规定硝酸盐的ADI （日允许 量）为3.6mg/kg （体重）。测定蔬菜硝酸盐含量可为指导蔬菜合理施肥提供依据。 2、实验原理 蔬菜中积累的 NO3- ，经提取处理后，在无水条件下与酚二磺酸试剂作用， 生成硝基酚二磺酸。 C H OH(HSO ) +HNO =C H OH(HSO ) NO +H O 6 3 3 2 3 6 2 3 2 2 2 2 ，4-酚二磺酸 6-硝基酚-2 ，4-二磺酸 生成物在酸性介质中无色，碱化后则为稳定的黄色盐溶液，可在400-425nm 处比色测定。 3、试剂配制 （1）酚二磺酸显色剂：将3g 结晶纯酚与20.1ml 浓H SO （比重1.84）混 2 4 合，在沸水浴上加热6 小时，加热时瓶口用带长玻管的塞子塞住，以使酸不致于 蒸发损失（如有结晶，可以重新加热，不能加水）。 （2 ）20%NaOH 溶液：20gNaOH 加水溶解，稀释至100ml 。 （3 ）硝态氮标准溶液：0.7218gKNO3 （A ·R ）溶于水，定容至1L。此溶液 每毫升含硝态氮 100μ g （100mg/kg ）。再将此液稀释10 倍，即每毫升含硝态氮 10μ g （10 mg/kg ）。 （4 ）硝态氮标准曲线绘制：分别取10μ g /ml 硝态氮标准液2 、4、6、8、 10、12ml （分别为20、40 、60、80、100、120μ g ）于瓷蒸发皿中，在水浴上蒸 干，与待测液相同操作进行显色，比色，绘制标准曲线。 4、操作步骤 取鲜菜20g，置于高速捣碎机中，加水150ml 左右，捣碎，然后移入250ml 容量瓶中，用少量水冲洗捣碎溶液2-3 次，定容至250ml ，摇匀。取约一半的样 液于300ml 磨口三角瓶中，盖上带冷凝管的瓶塞，在电炉上加热煮沸，使溶液中 大部分叶绿素凝固沉淀，达到液相一固相分离。此时溶液呈淡绿色或无色。取出 冷却，过滤于另一三角瓶中备用。 将上述滤液吸取1-2ml（白菜、菠菜硝态氮含量较高），若含量低可吸取5-10ml 于 100ml 瓷蒸发皿中，在水浴上蒸干。冷却后在残渣中加 1ml 酚二磺酸，旋转 蒸发皿，并用圆头破棒充分搅动10 分钟后加蒸镏水15ml ，逐渐滴加20% 的氢氧 化钠溶液，使溶液在碱性条件下成稳定的黄色。然后转移到50ml 容量瓶中，用 水洗蒸发皿，一同移入容量瓶中，稀释至刻度，最后在分光光度计上于 420nm 处比色，再与标准曲线比较，求出NO3-含量。 5、结果计算 - C NO3 （mg/kg）= 分取倍数 W - 式中： C——显色液NO 的微克数； 3 W——称取样品重 （g）   样品捣碎后定容体积250ml