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复旦大学 博士学位论文 前体mRNA剪辑蛋白Tra2基因在神经组织中的表达特征、发育调 控及功能 姓名：陈献华 申请学位级别：博士 专业：生物物理学 指导教师：徐平 复旦大学博士学位论文 前体mRNA剪辑蛋白Tra2基因在神经组织中的表达特征、发育调控及功能 中文摘要 中文摘要 前体mRNA剪辑蛋白Tra2基因在神经组织中的表达特征、发育 调控及功能 在果蝇中是性发育的关键调控蛋白，在哺乳动物中，性别决定的机制与果蝇中完 全不同，Tra2可能具有其它的功能。有限的研究提示Tra2蛋白在哺乳动物中可 能与发育有关。但该基因在哺乳动物中的表达特征、发育调控及其生理功能和作 用机制如何，目前尚不清楚。本论文的目的便是针对上述问题，研究Tra2在神 经发育过程中的表达特征及其功能。 基因表达谱分析是研究基因功能及其调节的重要一环。Tra2已知有多种亚型 方面，它的各个亚型的表达谱是否会随着发育阶段和组织类型的不同而受到调 节?对此，我们首先分析Tra2各个亚型在不同发育阶段和不同组织的基因表达 谱。其中包括考察在发育过程中是否会有新的Tra2的亚型产生。我们利用RT-PCR 扩增的方法，对人胚胎组织中的Tra2进行扩增，在Tra2B扩增时，没有发现新的 亚型，但在扩增Tra2a时，发现了一种新的Tra2亚型，它与Tra20c具有相当高的 Tra2各个皿型的表达量在不同组织和不同发育阶段之间是否存在差异，我们利用 种组织中均有表达，其表达量随发育阶段的不同而有变化，但不同组织之间表达 量差异较小。而Tra2133的表达则有明显的组织和发育阶段调控特征。在11周时， 所有组织中均未检测到其表达，而在16周时，所有组织中均检测出了Tra2133条 带，但各组织之间表达量变化幅度很大。Tra2．134的表达特征与Tra2133类似，在 ll周时，它仅在包括小脑在内的几种组织中表达，在16周也表现出在各组织中 为普遍表达，从11周到16周，绝大多数组织中该两种Tra2亚型的表达都有增 加。上述结果从基因表达层次提示：在人类发育(包括神经发育)过程中，对 Tra2蛋白的选择性剪辑的调节功能的需求也随不同的组织和发育阶段而变化。 研究表明，Tra2蛋白具有前体mRNA剪辑调节蛋白的特性。因此，与mRNA 层次的研究相比，从蛋白质水平上研究Tra2蛋白在发育中的调控可更为直接的 复旦大学博士学位论文 盟堡!!坠塑塑蛋白Tra2二塑在神经组织中的表达特征、发育调控发功能 中文摘要 反映该蛋白在发育中的功能。因此，本文进～步在蛋白水平上考察了Tra2表达 是否与发育过程相关。为此，我们首先制备了用于检测Tra2蛋白各亚型的特异 和Tra2131蛋白的特异抗原片段，在细菌中表达并纯化该片断所编码肽段的GST 体的特异性之后，我们用获得的抗体和另一种可同时检测全长型Tra2131和截短 进行了Western印迹检测，结果是：在Tra213的两种蛋白亚型中，仅检测到全长 蛋白是主要蛋白。Tra2131在发育中的各组织中明显为普遍性表达，但在神经组 织中(包括大脑、小脑、延髓和脊髓)中的表达高于非神经组织(肝、心、肺、 肾和肠)：Tra2al蛋白的表达具有明显的组织特异性，除了在神经组织(大脑、 小脑、延髓和脊髓)中始终表达外，在非神经组织中，除了在11周的心、肾和 16周的心脏组织中检测到表达外，其余组织中均无可检测出的表达。这一结果 提示Tra2蛋自在发育中的神经组织中可能有重要功能。 在对Tra2进行了表达分析的基础上．我们进一步对其功能进行研究。首先 要考察的是Tra2蛋白在细胞内发挥功能的场所，即Tra2蛋白在细胞内的分布特 蛋白，并通过激光共聚焦显微镜检测绿色荧光的方法来对Tra2蛋白进行亚细胞 呈点状或融合状态，此