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核 酸 提 取 技 术;前 言;DNA和RNA都是极性化合物，溶于水，不溶于乙醇、氯仿等有机溶剂，它们的钠盐比游离酸易溶于水。在酸性溶液中，DNA、RNA易水解，在中性或弱碱性溶液中较稳定。;主要内容;核酸提取的意义;核酸提取的一般程序;细胞的裂解;一般动物组织和细胞可用电动捣碎机或匀浆器破碎或用超声波处理破碎。 植物组织和细胞由于具有纤维素、半纤维素和果胶等物质组成的细胞壁，一般常用与石英砂和适当的提取液一起研磨的方法破碎或用纤维素酶处理也能达到目的。 细菌细胞的破碎比较困难，因为整个细菌细胞壁的骨架实际上是一借共价键连接而成的肽聚糖囊状大分子，非常坚韧。;细菌有坚硬的细胞壁，裂解细胞有三种方法： ;细胞裂解后，核酸与大量杂质在一起，必须进行分离纯化。;微生物核酸提取的方法原理;微生物核酸提取的方法原理;原理：利用蛋白酶消化降解蛋白质，达到去除蛋白质的目的。;;核酸提取质量的鉴定;核酸提取的注意事项;DNA提取的方法;基因组DNA－ CTAB法;原理; SDS法流程图;基因组DNA－其它方法;基因组DNA－其它方法;基因组DNA－其它方法;质粒DNA－碱裂解法;质粒DNA－碱裂解法－流程;质粒DNA－煮沸法;DNA提取的基本步骤;材料准备;细胞裂解;核酸分离、纯化;核酸分离、纯化;多糖的去除：;多酚的去除： 在抽提液中加入防止酚类氧化的试剂：β-巯基乙醇、抗坏血酸、半胱氨酸、二硫苏糖醇等 加入易与酚类结合的试剂：如PVP、PEG(聚乙二醇)，它们与酚类有较强的亲和力，可防止酚类与DNA的结合;核酸沉淀、溶解; ;材料不新鲜或反复冻融 未很好抑制内源核酸酶的活性 提取过程操作过于剧烈，DNA被机械打断 外源核酸酶污染 反复冻融;实验材料不佳或量少 破壁或裂解不充分 沉淀不完全 洗涤时DNA丢失;RNA提取的通用方法;步骤:;影响RNA提取的因素;影响RNA提取的因素;;RNA提取常见问题;RNA降解;RNA降解;OD260 /OD280 比值偏低; 抽提试剂残留： 确保洗涤时要彻底悬浮 RNA，并且彻底去掉 75% 乙醇。 解决办法:再沉淀一次后，溶解。 设备限制： 测定OD260 及OD280 数值时，要使OD260 读数在 0.10~ 0.50 之间。此范围线性最好。 用水稀释样品： 测 OD 时，对照及样品稀释液请使用 10 mM Tris，pH 7.5。用水作为稀释液将导致比值的降低。 ;电泳带型异常;下游实验效果不佳;DNA和RNA都是极性化合物，溶于水，不溶于乙醇、氯仿等有机溶剂，它们的钠盐比游离酸易溶于水。在酸性溶液中，DNA、RNA易水解，在中性或弱碱性溶液中较稳定。;微生物核酸提取的方法原理;核酸提取的注意事项;DNA提取的方法;原理;多糖的去除：;影响RNA提取的因素;下游实验效果不佳