核酸的分子杂交.pptxVIP

第五节 核酸的分子杂交Nucleic Acid Hybridization;Content of Table; 前 言; 核酸分子杂交 把亲源关系较近的，不同生物个体来源的变性DNA或RNA单链，经退火处理形成DNA-DNA或DNA-RNA这一过程叫分子杂交。;1 核酸分子杂交技术的原理; 应 用： (1)检测特定生物有机体之间是否存在亲缘关系； (2)用来揭示核酸片段中某一特定基因的存在与否、拷贝数及表达丰度。 ;2 核酸探针的制备;2.2 探针的制备方法;2.3 探针的分类 据来源及性质不同可分为： (1) 基因组DNA探针 (2) cDNA探针 (3) RNA探针 (4) 寡核苷酸???针;2.4 合成寡核苷酸探针注意原则;3 核酸探针的标记;3.1 标记的种类;一个理想的标记物应满足： (1)标记前后探针基本结构、化学性质相同; (2)特异性强、本底低、重复性好； (3)操作简单、节时； (4)安全、无环境污染。;3.2 探针的标记方法;缺口平移法的原理;随机引物标记法原理;末端标记法原理;生物素光照标记法;4 核酸分子杂交技术; 此技术由Southern 1975年首先设计。被检测对象为DNA。 ;带有DNA片段的凝胶;;。;;4.2 Northern印迹杂交;4.3 Western印迹杂交;4.4 斑点印迹杂交和狭线印迹杂交;4.5 原位杂交in situ hybridization;5 生物芯片;5.1 生物芯片的分类;基因芯片：是指将大量探针分子固定在物体表面，与标记的样品分子进行杂交，通过检测每个探针分子的杂交信号强度，进而获取样品分子的数量和序列信息。 它以其可同时、快速、准确地分析数以千计的基因组信息而显示巨大威力。 目前，基因芯片已经应用于基因表达检测、寻找新基因、杂交测序、基因突变等许多方面。;蛋白芯片：是以蛋白质代替DNA作为检测对象，比基因芯片更进一步接近生命活动的物质层面，因而有着比基因芯片更加直接的应用前景。 ;芯片实验室：是生物芯片技术发展的最终目标。它将样品制备、生化反应和检测分析的全过程集约化，形成微型分析系统。目前，这种形式尚处于研发阶段。;5.2 DNA芯片技术的基本原理;据芯片的性能与用途分： 1）毛细管型微芯片 2）基因探针型微芯片 据DNA芯片上微排列的DNA不同分： 1）寡核苷酸芯片 2）cDNA芯片;◆芯片方阵的构建 ◆样品制备 ◆生物分子反应 ◆信号的检测及分析 ; 可在基因组水平进行基因表达和发现研究、突变、序列测定等，已方泛应用于基因组研究和人类疾病的诊断等多领域。;Home;Content of Table;2.3 探针的分类 据来源及性质不同可分为： (1) 基因组DNA探针 (2) cDNA探针 (3) RNA探针 (4) 寡核苷酸探针;2.4 合成寡核苷酸探针注意原则;带有DNA片段的凝胶;4.4 斑点印迹杂交和狭线印迹杂交;基因芯片：是指将大量探针分子固定在物体表面，与标记的样品分子进行杂交，通过检测每个探针分子的杂交信号强度，进而获取样品分子的数量和序列信息。 它以其可同时、快速、准确地分析数以千计的基因组信息而显示巨大威力。 目前，基因芯片已经应用于基因表达检测、寻找新基因、杂交测序、基因突变等许多方面。