SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的相对分子质量.pdfVIP

实验教学教案首页 本次实验项目： SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质相对分子质量 本次实验课时： 8 学时 实验类型：设计性 教学要求： 1． 用 SDS －PAGE 法测定样品中蛋白质相对分子质量； 2 ． 熟悉操作过程；掌握实验方法；明确实验原理。 3 ． 够根据实验目的进行整个实验过程的设计与操作，如标准蛋白质的选择、分离胶与 浓缩胶浓度的确定与制备、灌胶、样品的处理、上样量及方法的选择、电泳时电压 的控制、染色与脱色时间的确定、并能够对电泳过程中出现的问题加能解决，能够 独立思考分析电泳结果，总结本实验成功与失败的原因。 重 点： 实验原理、 整个实验过程的设计与操作， 如标准蛋白质的选择、 分离胶与浓缩胶浓度的 确定与制备、灌胶、样品的处理、上样量及方法的选择。 教学手段及教具：课堂讲授，学生实验操作。 讲授内容及时间分配： 课堂讲授 1．相关知识…………………………………………………………… …… 0.1 学时 2．实验目的………………………………………………………………… … 0.3 学时 3．实验原理…………………………………………………………………… 0.3 学时 4 ．实验操作 …………………………………………………… … 0.3 学时 实验教学 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质相对分子质量实验的操作技术……… 7 学时 参考资料 《生物化学实验》 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质相对分子质量（设计性） 相关知识 1.电泳？ 2.影响电泳速率的因素？ 3.SDS 的作用？ 4. β－乙醇的作用？ 2 ．聚丙烯酰胺凝胶电泳（ PAGE ）： 丙烯酰胺 TEMED 聚丙烯酰胺凝胶 甲叉丙烯酰胺 过硫酸铵 3.分类：自然胶电泳、变性胶电泳、等电聚焦电泳、梯度胶电泳、双向电泳、印迹转移电泳。 4.不连续缓冲系统： SDS －PAGE 电泳体系为不连续电泳体系。 Tris-Gly pH8.3 － 浓缩胶 pH 6.8 - Gly 分离胶 pH8.8 Pr Cl ＋ Tris-Gly 5 ．分离胶浓度的选择和配制方法 SDS 聚丙烯酰胺凝胶的有效分离范围 蛋白质相对分子质量范围 分离胶的浓度 4 ＜ 10 20% ~ 30% 4 4 1 ×10 ~ 4 ×10 15% ~ 20%