胰酶配制及注意事项.docxVIP

。 页 博客 相册 个人档案 好友 细胞消化胰酶的配制 对一般细胞 0.25% 胰酶 ( 胰蛋白酶， Trypsin) 配方： 100ml PBS,0.25g 胰酶 步骤： 1 先配 100mlPBS(1000mlPBS:8.0gNaCl,3.4785gPO4HNa2 · 12H2O /2.9gPO4HNa2 ,0.2gKCl,0.2gPO4H2K 溶于 1000ml 蒸馏水 ) 2 称胰酶 0.25g 3 加入 PBS中，低速搅拌 〈 4h 冰浴中 , 或者 4℃过夜 低速搅拌 0.5h 冰浴中 调 PH7.4 仍在冰浴中 过滤，分装， -20 ℃保存， 4℃短期内用完 tip: 低速很重要，机械搅拌对酶是一种冲击，如果起沫， 酶就变性了。低温，防止酶失活 对难消化的细胞：在上述配方中，加入 0.02g 的 EDTA(0.02%) tip: 因为 EDTA可以络合 Ca2 ，增加消化效力 问：请问哪位仁兄能告知一下 EDTA-胰蛋白酶的配制。急用！多谢！ 答： 1、胰酶是 0.25%, 这是质量体积比，就是说 0.25g 胰酶溶于 100ml PBS, 注意，尽量不要用水来溶，因为要保持渗透压。 2、EDTA的工作液溶度是 0.02%－0.1%，根据细胞消化的难易程度自己调整。 EDTA并不是必须的， 容易消化的细胞可不加。 EDTA对细胞 贴 壁性有影响，因此使用时要