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第2节 动物细胞工程
一、教学目标
(1)阐明动物细胞培养的条件和过程。
(2)简述干细胞在生物医学工程中有广泛的应用价值。
(3)阐明利用动物细胞融合技术制备单克隆抗体的过程,认同单克隆抗体在
临床上有重要的应用价值。
(4)阐明利用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程和该技术的应用前景。
二、教学重点
(1)动物细胞培养的条件和过程。
(2)干细胞和生物医学工程中的应用。
(3)单克隆抗体的制备和应用。
(4)用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程。
三、教学难点
(1)单克隆抗体的制备过程。
(2)用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程。
四、课时安排
5课时
五、教学过程
(一)新课导入
同学们,前面我们学习了植物细胞工程,先来回忆一下,植物细胞工程的基本技术有什么?(植物组织培养技术和植物体细胞杂交技术),那么植物组织培养的理论基础或者原理是什么?(植物细胞的全能性),植物体细胞杂交的流程是什么?(酶解法去壁形成原生质体,诱导融合形成杂种细胞,再生出细胞壁代表融合完成,然后经过脱分化、再分化过程形成杂种植株)。
今天让我们一起来学习动物细胞工程及其常用的技术,先来思考一个问题:对于大面积烧伤的病人来说,急需进行健康的皮肤移植,那么这样皮肤可以来自哪里呢?
有同学说,可以将该病人自己其他部位的健康皮肤移植到烧伤部位,但是自身的健康皮肤非常有限,也有的同学说,可以移植其他人的健康皮肤,但这不仅来源不足,还会发生免疫排斥反应,那我们能不能用该病人的健康皮肤进行体外培养、扩增,形成如图所示的人造皮肤,这样再移植回去,不就没有免疫排斥反应了吗?
事实上,科学家已经做过这样的实验,并且已经获得了成功,目前,科学家正在研究对皮肤干细胞进行培养,以期获得适合临床上应用的人造皮肤,从而提高烧伤病人皮肤移植的成功率,那么科学家所利用的关键技术就是动物细胞培养,下面我们来了解一下怎样在体外进行动物细胞培养。
(二)讲授新课
一、动物细胞培养
动物细胞工程包括三大常用技术:动物细胞培养、动物细胞融合、动物细胞核移植,其中,动物细胞培养是动物细胞工程的基础。
先找同学给念一下它的概念
1)概念:
是指从动物体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后在适宜的培养条件下,让这些细胞生长和增殖的技术。
2)原理
细胞增殖(有丝分裂)
3)结果
获得数量更多的相同细胞或细胞产物(但不能获得完整动物个体。)
4)分散的原因
①成块组织中细胞与细胞靠在一起,会限制彼此的生长与增殖
②使细胞与培养液充分接触,保证细胞所需的O2和营养供应
③保证细胞内代谢物及时排出。
过渡:那么,既然要在体外培养动物细胞,就要提供适合细胞生长的条件,这些条件越接近体内越好,那么大家回忆一下我们选择性必修1讲过的知识
提问:①以人为例,体内细胞生活在哪里?(内环境/细胞外液中)
②内环境为生活于其中的细胞提供了什么样的条件呢?(营养条件如
糖类、氨基酸、无机盐、维生素等;其他环境条件如温度37℃左右、
pH 7.35-7.45、渗透压 770kPa等)
过渡:因此在体外培养动物细胞时,也要满足类似的条件。
1、动物细胞培养的条件
动物细胞培养所需的基本条件包括营养条件和其他条件
1)营养:
有机物:糖类(一般是葡萄糖)、氨基酸、维生素等
无机物:无机盐(包括大量元素、微量元素)
合成培养基:将细胞所需的营养物质按种类和所需量严格配制而成的培养基
(合成培养基的化学成分是已知的,有别于天然培养基)
由于人们对细胞生长所需的营养物质尚未研究清楚,因此在使用合成培养基
时通常需要加入动物血清(10%-20%)
其他物质:动物血清(其中含有多种未知的促细胞生长因子及其他活性物质)
(血清指血液自然凝固,经离心沉淀后得到的上面淡黄色的液体,不含纤维
蛋白原)
动物细胞培养一般在液体培养基中进行,也叫培养液。
2)无菌、无毒的环境:
无菌:培养液和所有培养用具进行灭菌,也可在培养液中加入一些抗生素,此外,需要在无菌环境下进行操作。这是因为适合动物细胞生长的培养液也适合微生物的生长。
无毒:定期更换培养液,以清除细胞代谢物(细胞在动物体内产生的代谢物可通过循环、泌尿系统等排出)
3)温度、pH和渗透压:
温度:36.5±0.5℃
pH: 7.2-7.4
培养液呈暗红色:加入了pH指示剂,根据pH的改变而呈现不同的颜色,方
便培养细胞时进行判断
4)气体环境:
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