流式细胞周期结果图解读.docxVIP

流式 胞周期 果 解 (附 解 )Time：2010-12-07 PM 19:03 Author:bioer Hits: 51 times 流式 胞周期操作步 胞培养： 取 数生 期的 胞，按 1×106cells/ mL 以 1mL 接种 24 孔板或 2mL 接种于 6 孔板内， 行所需的 理（比方加入 物） ，特定 后 止培养， 行下一步的 。 胞固定： 800rpm 离心 5min，收集 胞积淀， 弃上清，用 冷 PBS洗 两次， 加入 冷 75%乙醇，于 4℃ 固定 4h 以上。 胞染色： 1500rpm 离心 5min，弃上清，以 3mL 的 PBS洗 一次，加入 400uL 溴化乙 （ PI，50ug/mL ）， 100ul RNase A（ 100ug/mL ）， 4℃ 避光孵育 30min 。 流式剖析： 以 准程序用流式 胞 ，一般 数 2~3 万个 胞， 果用 胞周期 和 件 ModFit 剖析。 注：上机前要以  50um  尼 网膜或  35um  胞 器 胞！因  PI 具有很 的粘附性， 容易使 胞聚 ！ 流式 胞周期 果 解 首先来 一下流式 胞周期 果 ： 1、 坐 Cell Number ：即 数的有效 胞数； 2、横坐 DNA Content ：即 DNA 含量； 3、 G1、G2、 S 三期在 中已 示； 4、右 数字含 ： Dip G1-53.84% at 55.56，即 G1 期 DNA 含量平均 55.56；53.84% 即 G1期 胞数占 数的 53.84%；Dip G2-5.64% at 107.72，即 G2 期 DNA含量平均 107.72 ， 5.64%即 G2 期 胞数占 数的 5.64%；以此 推 ? 流式 胞周期 果 的意 ，主要从 胞周期的角度看各参数的意 ： 1、 胞周期指由 胞分裂 束到下一次 胞分裂 束所 的 程，所需的 叫 胞周期 。 可分 四个 段： ① G1 期 (gap1)，指从有 分裂达成到期 DNA 复制之前的 隙 ； S 期 (synthesis phase)，指 DNA 复制的 期； G2 期 (gap2)，指 DNA 复制达成到有 分裂开始之前的一段 ； ④ M 期又称 D 期 (mitosis or division) ， 胞分裂开始到 束。 2、从增殖的角度来看，可将高等 物的 胞分 三 ： ① 连续分裂细胞，在细胞周期中连续运转因而又称为周期细胞，如表皮生发层细胞、 部分骨髓细胞。 ② 休眠细胞暂不分裂， 但在适合的刺激下可从头进入细胞周期， 称 G0 期细胞， 如淋巴 细胞、肝、肾细胞等。 ③ 不分裂细胞， 指不可逆地脱离细胞周期， 不再分裂的细胞， 又称终端细胞， 如神经、 肌肉、多形核细胞等等。 细胞周期的时间长短与物种的细胞种类相关，如：小鼠十二指肠上皮细胞的周期为 10 小时，人类胃上皮细胞 24 小时，骨髓细胞 18 小时，培养的人成纤维细胞 18 小时， CHO 细 胞 14 小时， HeLa 细胞 21 小时。 不同种类细胞的 G1 长短不同， 是造成细胞周期差别的主要 原因。 3、流式细胞结果图各参数的意义： 常用的流式细胞术剖析细胞周期的方法是依据细胞 DNA 含量（横坐标）来剖析的： G1 期： DNA 复制还没开始，也是 DNA 含量最少的，即流式检测结果图的第一个峰； S 期： DNA 开始复制，到达成复制，是一个一倍 DNA 到二倍 DNA 的过程，在流式结果 图中显示期跨度特别大（第二个不高但很宽的峰） ； G2 期： DNA 复制达成至分裂的一段时间，此时细胞内含二倍  DNA，在流式结果图中的 第三个峰； M 期：细胞分裂过程，此时细胞内也是二倍  DNA，用  DNA 含量的方法是无法与  G2 期 分开，所以有第三峰明显升高时报告：  G2/M  期阻滞。