血红蛋白的提取和分离时.pptxVIP

血红蛋白;1.分离生物大分子的基本思路：;一、基础知识;原理：;分子量;4.凝胶色谱法分离蛋白质的原理和具体过程; （二）缓冲溶液;1.概念：;;电泳检测结果;; 蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决 于它所带净电荷的多少以及分子的大小等因素。 （SDS的作用）为了消除净电荷对迁移率的影响， 可以在凝胶中加入SDS。 ;用SDS测定蛋白质分子量的方法;使用SDS-聚丙烯酰胺电泳过程中，不同蛋白质的电泳迁移率完全取决于 A 电荷的多少 B 分子的大小 C 肽链的多少 D 分子形状的差异 ;1. 血液有哪些成分？;2.用鸡的红细胞提取DNA，用猪、牛、羊的红细胞提取血红蛋白的原因是什么？; 二、实验操作;(2)血红蛋白的释放：;(4)透析：(粗分离);透析过程动画演示;练习巩固;2、用凝胶色谱法分离蛋白质的过程中，关于蛋白质的叙述，正确的是 A 相对分子质量较小的蛋白质行程大于相对分子质量较大的蛋白质 B 相对分子质量较小的蛋白质行程小于相对分子质量较大的蛋白质 C 相对分子质量较小的蛋白质行程等于相对分子质量较大的蛋白质 D 二者根本无法比较;2.凝胶色谱操作:;（2）凝胶色谱柱的装填; ;（3）样品加入与洗脱;（3）样品加入与洗脱;ＡＣＤ;（三）SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳（选做）;收集得到的纯化后的蛋白; 观察你处理的血液样品离心后是否分层（见教科书图5-18），如果分层不明显，可能是洗涤次数少、未能除去血浆蛋白的原因。此外，离心速度过高和时间过长，会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀，也得不到纯净的红细胞，影响后续血红蛋白的提取纯度。;三、实验结果分析与评价; 如果凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也正确的话，能清楚地看到血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平整，随着洗脱液缓慢流出；如果红色区带歪曲、散乱、变宽，说明分离的效果不好，这与凝胶色谱柱的装填有关。; 血红蛋白提取和分离的程序可分为四大步，包括：样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定。首先通过洗涤红细胞、血红蛋白的释放、离心等操作收集到血红蛋白溶液，即:样品的处理；再经过透析去除分子量较小的杂质，即样品的粗分离；然后通过凝胶色谱法将相对分子质量较大的杂质蛋白除去，即:样品的纯化；最后经聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定。;思考下面的问题：;;电泳检测结果;(4)透析：(粗分离);（2）凝胶色谱柱的装填;ＡＣＤ;三、实验结果分析与评价