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分光光度法测食品中的亚硝酸盐 分光光度法测食品中的亚硝酸盐 第二法 分光光度法 亚硝酸盐采用盐酸萘乙二胺法测定，硝酸盐采用镉柱还原法测定。 试样经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色染料，外标法测得亚硝酸盐含量。采用镉柱将硝酸盐还原成亚硝酸盐，测得亚硝酸盐总量，由此总量减去亚硝酸盐含量，即得试样中硝酸盐含量。 9 试剂和材料 除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯。水为GB/T 6682 规定的二级水或去离子水。 9.1 亚铁氰化钾（K 4Fe (CN ) 6·3H 2O ）。 9.2 乙酸锌（Zn (CH 3COO ) 2·2H 2O ）。 9.3 冰醋酸（CH 3COOH ）。 9.4 硼酸钠（Na 2B 4O 7·10H 2O ）。 9.5 盐酸（ρ＝1.19 g/mL）。 9.6 氨水（25 %）。 9.7 对氨基苯磺酸(C 6H 7NO 3S ）。 9.8 盐酸萘乙二胺(C 12H 14N 2·2HCl ）。 9.9 亚硝酸钠（NaNO 2）。 9.10 硝酸钠（NaNO 3）。 9.11 锌皮或锌棒。 9.12 硫酸镉。 9.13 亚铁氰化钾溶液(106 g/L) ：称取106.0 g 亚铁氰化钾（9.1），用水溶解，并稀释至1000 mL 。 9.14 乙酸锌溶液(220 g/L) ： 称取220.0 g 乙酸锌（9.2），先加30 mL 冰醋酸（9.3）溶解，用水稀释至1000 mL。 9.15 饱和硼砂溶液(50 g/L) ： 称取5.0 g 硼酸钠（9.4），溶于100 mL 热水中，冷却后备用。 9.16 氨缓冲溶液（pH 9.6～9.7）：量取30 mL 盐酸（9.5），加100 mL 水，混匀后加65 mL 氨水（9.6），再加水稀释至1000 mL，混匀。调节pH 至9.6～9.7。 9.17 氨缓冲液的稀释液：量取50 mL 氨缓冲溶液（9.16），加水稀释至500 mL，混匀。 9.18 盐酸(0.1 mol/L)： 量取5 mL 盐酸，用水稀释至600 mL。 9.19 对氨基苯磺酸溶液（4 g/L）：称取0.4ｇ对氨基苯磺酸（9.7），溶于100 mL 20 %（V/V）盐酸中，置棕色瓶中混匀，避光保存。 9.20 盐酸萘乙二胺溶液（2 g/L）：称取0.2 g 盐酸萘乙二胺（9.8），溶于100 mL 水中, 混匀后，置棕色瓶中，避光保存。 9.21 亚硝酸钠标准溶液（200 μg /mL）：准确称取0.1000ｇ于110℃～120℃干燥恒重的亚硝酸钠，加水溶解移入 500 mL 容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。 9.22 亚硝酸钠标准使用液（5.0 μg/mL）：临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液5.00 mL，置于200 mL 容量瓶中，加水稀释至刻度。 9.23 硝酸钠标准溶液（200 μg/mL，以亚硝酸钠计）：准确称取0.1232 g 于110 ℃～120 ℃干燥恒重的硝酸钠，加水溶解，移于入 500 mL 容量瓶中，并稀释至刻度。 9.24 硝酸钠标准使用液（5 μg/mL）：临用时吸取硝酸钠标准溶液2.50 mL，置于100 mL 容量瓶中，加水稀释至刻度。 10 仪器和设备 10.1 天平：感量为0.1 mg 和1 mg。 10.2 组织捣碎机。 10.3 超声波清洗器。 10.4 恒温干燥箱。 10.5 分光光度计。 10.6 镉柱 10.6.1 海绵状镉的制备：投入足够的锌皮或锌棒于 500 mL 硫酸镉溶液(200 g/L)中，经过3 h ～4 h，当其中的镉全部被锌置换后，用玻璃棒轻轻刮下，取出残余锌棒，使镉沉底，倾去上层清液，以水用倾泻法多次洗涤，然后移入组织捣碎机中，加500 mL 水，捣碎约2 s，用水将金属细粒洗至标准筛上，取20 目～40 目之间的部分。 10.6.2 镉柱的装填：如图2。用水装满镉柱玻璃管，并装入2 cm 高的玻璃棉做垫，将玻璃棉压向柱底时，应将其中所包含的空气全部排出，在轻轻敲击下加入海绵状镉至8 cm～10 cm 高，上面用1 cm 高的玻璃棉覆盖，上置一贮液漏斗，末端要穿过橡皮塞与镉柱玻璃管紧密连接。如无上述镉柱玻璃管时，可以25 mL 酸式滴定管代用，但过柱时要注意始终保持液面在镉层之上。当镉柱填装好后，先用25 mL 盐酸(0.1 mol/L)洗涤，再以水洗两次，每次25 m