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葛根素通过Fetuin B-AMPKACC信号通路减轻2型糖尿病小鼠肝脏胰岛素抵抗 摘要：目的 探讨葛根素通过Fetuin B-AMPK/ACC信号通路对高脂饮食联合链脲佐菌素诱导的2型糖尿病小鼠肝脏胰岛素抵抗的调控机制。方法 C57BL/6J小鼠随机选取10只正常饮食作为正常对照组，其余40只通过高脂饲料喂养联合腹腔注射100 mg/kg链脲佐菌素建立2型糖尿病小鼠模型，造模成功后采用随机数字表法将小鼠分为模型对照组、葛根素低剂量组（Pue-50 mg/kg）、葛根素中剂量组（Pue-100 mg/kg）和葛根素高剂量组（Pue-200 mg/kg），干预8周。末次给药后，尾静脉取血检测各组小鼠空腹血糖（FBG），取血和肝组织；ELISA法检测各组小鼠血清空腹胰岛素（FINS），肝脏甘油三酯、胆固醇、游离脂肪酸水平；HE染色法观察小鼠肝脏病理变化；免疫组化法检测小鼠肝脏Fetuin B含量；实时荧光定量聚合酶链式反应法检测小鼠肝脏Fetuin B、AMPK、ACC mRNA表达；Western blot法检测小鼠肝脏Fetuin B、AMPKα1、ACC、P-AMPKαT183/T172、P-ACCS79蛋白表达。结果 末次给药后，Pue-100 mg/kg、Pue-200 mg/kg剂量组甘油三酯、胆固醇、游离脂肪酸及FBG低于模型对照组（P0.01）；葛根素不同剂量给药组较正常对照组，FINS和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)降低（P0.01）。与正常对照组比较，模型对照组小鼠肝脏Fetuin B、ACC mRNA表达明显上升，AMPK mRNA表达降低（P0.01）;Fetuin B、ACC蛋白表达升高，AMPKα1、PAMPKαT183/T172、P-ACC S79蛋白表达降低（P0.01）；病理学观察到肝脏脂肪变性明显，肝脏Fetuin B表达含量增加。与模型对照组比较，葛根素呈剂量依赖性抑制肝脏Fetuin B、ACC mRNA表达和Fetuin B、ACC蛋白表达，上调AMPK mRNA表达和AMPKα1、P-AMPKαT183/T172、P-ACC S79蛋白表达（P0.01）。Pue-50 mg/kg给药组上调AMPK mRNA表达，下调ACC mRNA表达差异无统计学意义（P0.05）。结论 葛根素可能通过调节肝脏Fetuin B-AMPK/ACC信号通路减轻2型糖尿病小鼠胰岛素抵抗，进一步改善糖脂代谢。 2型糖尿病（T2DM）以糖脂代谢紊乱为主要表现，胰岛素抵抗是T2DM发病的关键因素，肝脏在全身代谢调节中发挥着至关重要的作用，肝脏胰岛素抵抗导致的代谢紊乱是影响机体葡萄糖和脂质代谢的关键葛根具有调节免疫、降血糖、降血脂、抗氧化等药理作用，属于在临床上运用广泛且治疗效果颇佳的中药。葛根素可以通过激活AMPK相关通路改善胰岛素抵抗，调节糖脂代谢1 材料和方法1.1 实验动物4～5周龄SPF级健康雄性C57BL/6J小鼠50只，体质量13～17 g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，实验动物生产许可证号：北京百善SCXK（京）2016-0006。动物饲养场所是北京维通利华实验动物技术有限公司上海分公司，实验动物使用许可证号：SYXK（沪）2017-0014。动物饲养在SPF级屏障环境中的实验动物设施IVC系统，动物房温度22±5℃，相对湿度（50±10）%，明暗周期12 h/12 h（光照时间8∶00～20∶00），鼠笼每日清洁消毒，所有小鼠自由饮水，自由饮食。本实验经上海中医药大学伦理会委员会批准。1.2 试剂高脂饲料[60%Kcal High-Fat(DIO)Diet，美国RDI]；葛根素（Sigma)。链脲佐菌素（STZ,Sigma）；羧甲基纤维素钠（CMC-Na，上海源叶生物）；小鼠胰岛素ELISA试剂盒、小鼠甘油三酯（TG)ELISA试剂盒、小鼠胆固醇（TC)ELISA试剂盒、小鼠游离脂肪酸（FFA)ELISA试剂盒（武汉华美生物）；RIPA裂解液、ECL发光剂（上海碧云天）；BCA试剂盒[生工生物工程（上海）]；AMPKα1、P-AMPKαT183/T172、ACC、P-ACCS79Antibody(Abcam）、内参抗体GAPDH，英国abcam，生工生物工程（上海））；Fetuin B Antibody（成都正能生物）；Hi Script 1st Strand c DNA Synthesis Kit（南京诺唯赞生物）。1.3 仪器罗氏血糖仪及试纸[罗氏诊断产品（上海）有限公司]；高速恒温冷冻离心机（上海安亭科学仪器厂）；微量移液器（日本NICHIRYO);SLAN-96P全自动医用PCR分析系统（上海宏石医疗）；酶标仪（Bio Tek);GENE G