毛水苏多糖对糖尿病小鼠肾脏的保护作用.docxVIP

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  • 2021-07-10 发布于广东
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毛水苏多糖对糖尿病小鼠肾脏的保护作用.docx

毛水苏多糖对糖尿病小鼠肾脏的保护作用 随着全球经济水平不断的提高,人们的生活习惯、膳食方面发生了巨大的改变,纷至沓来的是糖尿病等多种慢性疾病发生率的不断上升,极大的影响了人们的日常生活,危害了身体的健康 目前,临床上使用的一些降糖类药物虽然能改善Ⅱ型糖尿病患者的健康状况,但都会产生低血糖、胃肠道疾病及心脑血管疾病等不同的不良反应及毒副作用 毛水苏(Stachys baicalensis Fisch.ex Benth.)是唇形科水苏属多年生草本植物,喜欢生长于湿润、微酸的肥沃土壤,原产于巴尔干半岛、黑海沿岸至西亚,主要分布于我国东北三省、内蒙、山东、陕西等湿地地区,具有祛风解毒,止血之功效,可全株入药,但目前针对其多糖等药理活性成分的研究未见详细报道 1 材料与方法 1.1材料与仪器 雄性昆明小鼠SCXK(吉)-2020-0002 延边大学;高糖高脂饲料 北京博爱港生物技术有限公司;丙二醛测定试剂盒 南京建成生物工程研究所;超氧化物歧化酶测定试剂盒 南京建成生物工程研究所;谷胱甘肽过氧化物酶活力测定试剂盒 南京建成生物工程研究所;过氧化氢酶活力测定试剂盒 南京建成生物工程研究所;毛水苏 采于佳木斯大学农林实验实习基地(46°46′58″N, 130°21′6″E);Animal Total RNA Isolation Kit 成都福际生物技术有限公司 Cat. No.RE-03011/03014;2×F8 FastLong PCR MasterMix 北京艾德莱生物科技有限公司;PrimeScriptTM RT reagent Kit with gDNA Eraser TaKaRa Code No.RR047A;SYBR Green qPCR Mix (with Rox) 东盛生物科技有限公司 Cat. No P2091a;柠檬酸 北京博爱港生物技术有限公司;柠檬酸钠 北京博爱港生物技术有限公司;无水乙醇 天津市凯通化学试剂有限公司;链脲佐菌素 Sigma;盐酸二甲双胍缓释片 北京博爱港生物技术有限公司;氯化钠注射液 吉林省都邦药业股份有限公司。 台式高速冷冻微量离心机 Sigma;GA-3型血糖仪 三诺生物传感股份有限公司;血糖试纸 三诺生物传感股份有限公司;TDZ4-WS低速台式离心机 长沙湘仪离心机仪器有限公司;XDS-18倒置显微镜 北京荣兴光恒科技有限公司;FA2004电子天平 上海浦春计量仪器有限公司;全自动多功能酶标仪 Bio Tek;HWS-250B恒温恒湿箱 天津市泰斯特仪器有限公司;NanoDrop One Thermo Scientific;梯度PCR仪 Eppendorf;LightCycler96实时荧光定量PCR仪 罗氏;-80℃超低温冰箱 Thermo Scientific USA;微量移液器 Eppendorf;DYY-12型电泳仪 北京六一。 1.2 实验方法 1.2.1 SBP的提取 在锥形瓶中加入3.00 g烘干后的毛水苏粉末,按22:1 mL/g的液料比加入蒸馏水,超声辅助提取(22 min,350 W,70 ℃)的溶液冷却至室温,3500 r/min条件下离心15 min,保留上清液,进行抽滤,将得到的滤液减压浓缩,定容至10 mL,按1:4的比例加入无水乙醇,4 ℃冰箱醇沉24 h,醇沉液离心(3500 r/min,15 min),保留沉淀物,并将沉淀加蒸馏水溶解,再次减压浓缩,冷冻干燥得到粗多糖粉末。称取适量的冻干粉末,加入一定的蒸馏水溶解,采用AB-8大孔树脂脱除色素,5%三氯乙酸脱除蛋白,使用3500目透析袋除盐,将得到的去杂溶液减压浓缩,经DEAE-52纤维素层析柱分离得4组分,取含量占比最高组分为样品(多糖纯度70.50%),冻干备用 1.2.2 Ⅱ型糖尿病小鼠模型的建立及实验分组 挑选体重在(20±2)g范围内的清洁级昆明小鼠,随机平均分为7组,每组10只,共计70只,均为雄性。将小鼠于恒定温度18~22 ℃和湿度50%~60%的环境下饲养,普通饲料适应性饲养7 d,应性饲养后,随机抽取其中一组用普通饲料喂养,为空白组。其余6组改用高脂高糖饲料持续喂养,每7 d对小鼠的体重进行一次测量并每天更换垫料,4周后,小鼠禁食12 h后,使用STZ溶液对小鼠迅速进行腹腔注射,注射剂量为80 mg/kg,注射后死亡率为4.29%。空白组小鼠注射相同剂量柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液,恢复小鼠饮食,空白组小鼠喂食普通饲,其余6组小鼠喂养高脂高糖饲料维持血糖,腹腔注射结束72 h后,对小鼠做禁食12 h处理后,断尾取尾静脉血用于测定小鼠空腹血糖值。以11 mmol/L作为临界值,当测定的血糖值大于此数值时,

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