蛋白质分子结构.ppt

氨基酸与多肽;蛋白质分子结构;一、蛋白质的结构层次;二、蛋白质的一级结构 Primary structure ; ;蛋白质一级结构的测定步骤;(1) 样品准备：均一性、纯度、相对分子量、 肽链数目、氨基酸组成 (2) 一般步骤： 单条多肽链准备 至少两套肽段序列测定 蛋白质分子序列重建;;;蛋白质的氨基酸组成分析;;;;;酶解方法 ;? 胰蛋白酶(trypsin) 只断裂Lys、Arg残基的羧基参与形成的肽键 以马来酸酐可以保护Lys侧链的?-NH2，得到只含Arg羧基端的肽链；或者用1, 2-环已二酮修饰Arg的胍基，得到只含Lys羧基端的肽链 ? 胰凝乳蛋白酶(糜蛋白酶, chymotrypsin) 只断裂Phe、Trp和Tyr等疏水氨基酸残基的羧基端肽键。如果断裂点邻近的基团是碱性的，裂解能力增强；是酸性的，裂解能力将减弱;蛋白酶的水解专一性;;;;;;亮氨酸氨肽酶（Leucine amino peptidase, LAP）;多肽N端封闭;;;;;;4种羧肽酶的来源和专一性 ;则其氨基酸排列顺序为： Thr-Val-Lys-Ala-Ala-Trp-Gly-Lys ;;二硫键位置的确定 ;蛋白质一级结构测定流程;蛋白质测序新方法;HPhe-Val-Asn-Gln-His-Leu-Cys-Gly-Ser-His- Leu-Val- Glu- Ala- Leu- Tyr –Leu -Val-Cys-Gly;(1) 已知一个八肽完全降解后，分析其组成为 Ala，Gly(2)， Lys，Met， Ser，Thr，Tyr (2) 该八肽用溴化氰（CNBr）处理得到以下2个片段，组成分 别如下： (a) Ala，Gly， Lys， Thr (b) Gly， Met，Ser，Tyr (3) 用胰蛋白酶处理得到以下2个片段，组成分别如下： (a) Ala，Gly， (b) Gly，Lys，Met，Ser，Thr，Tyr， (4) 用胰凝乳(糜)蛋白酶处理得到以下2个片段，组成分别如下： (a) Gly，Tyr， (b) Ala，Gly，Lys，Met, Ser, Thr， (5) 经分析：N-末端残基是：Gly， C-末端残基是：Gly， 请确定该八肽的氨基酸序列 ; (1) CNBr水解Met羧基形成的肽键，故可得： Gly-(Tyr, Ser)-Met , (Thr, Lys, Ala)-Gly (a) Ala，Gly， Lys， Thr (b) Gly， Met，Ser，Tyr (2) 胰蛋白酶水解Lys和Arg羧基形成的肽键，故可得： Gly-(Tyr, Ser, Met, Thr)-Lys , Ala-Gly (a) Ala，Gly， (b) Gly，Lys，Met，Ser，Thr，Tyr (3) ???蛋白酶水解Phe, Trp,Tyr等疏水氨基酸羧基形成的肽 键, 故可得： Gly-Tyr, (Ser, Met, Thr, Lys, Ala)-Gly (a) Gly，Tyr， (b) Ala，Gly，Lys，Met, Ser, Thr， 综合以上情况，根据片段重叠，推测该肽的序列为： Gly-Tyr-Ser-Met-Thr-Lys-Ala-Gly;课 后 习 题;概念： 蛋白质中多肽链主链自身盘绕折叠形成的在一维方向上有规律性的结构 基本类型： ?-螺旋、?-折叠、?-转角、无规结构 稳定二级结构的作用力：氢键 ;构型与构象;肽键的特点;三、蛋白质的二级结构;?-螺旋;(3) 每个肽键的羰基氧与远在第四个氨基酸氨基上的氢形成氢键(共形成n-4个氢键)，所有肽键都能参与链内氢键的形成，氢键的方向与中心轴大致平行, 具有偶极距，是稳定螺旋的主要作用力; (2) ?-折叠 (? -pleated sheet );(３) 由氢键维持稳定，其方向与折叠的长轴接近垂直 ;* 纤维状蛋白中多存在反平行?-折叠，主要在不同肽链之间形成氢键 * 球蛋白中同时存在平