关于重组人血白蛋白系统性表述.docVIP

关于重组人血白蛋白的系统性表述 人血白蛋白（HSA）作为一种重要的临床急救药物及重要的药物辅料，在咲 药，科研及化妆品生产等领域应用广泛。随着国内医疗水平及居民收入水平的提 升和对血液制品认知度的提高，血液制品的临床使用量不断增加，市场容量不断 增长，行业快速发展。根据国家医药管理局的报告，2010年全国16城市医院血 液系统用药金额约62亿元，其中白蛋白类药物占据了血液制品的主要份额（大 于50%）o但作为一种血液制品，HSA同时也面临原料短缺及病毒污染等缺陷的 影响。 用基因工程重组人血清白蛋白（rHSA）替代HSA是国际上公认的最有前途 的高新技术途径。 一.什么是重组人血白蛋白 1 .定义 通过基因重组的技术将目的蛋白的基因克隆后，将该基因插入到某种牛物 （如细菌、酵母、植物，哺乳动物细胞等）中进行复制，然后收集的白蛋白称为 重组人血白蛋白。 rHSA的等级分类 按不同的质量标准分为了培养基级、药用辅料级和药用注射级（药用级）三 类，三类级别的重组人血口蛋口生产工艺相同，但最终控制参数不同，药用级口 蛋口质量标准最高。 rHSA的表达系统分类 白蛋白（Human Serum Albumin,HSA）是一组复杂的大分子蛋白质，必须经过正 确的折叠、组装和翻译后修饰，才能赋予其特定的结构和功能，表达系统是重 组人血白蛋白牛产过程中极其重要的环节。 （1）原核表达系统 HSA基因最早就是在原核生物大肠杆菌（E.coli）中表达成功的，Lawn等于1981 年首次报道了 rHSA的cDNA序列并首次构建了第一个表达rHSA的表达载体 pHSA,然后在E.coli中表达成功，表达量为细胞总蛋白的7%,但E.coli表达系统 体外很难正确折叠和组装结构复杂的HAS,缺乏翻译后的修饰和加工，表达的蛋 白多形成包涵体，且纯化较难，所以未能得到有生物功能的蛋细菌细胞壁脂 多糖还会造成热反应。因为HSA在原核生物屮表达量不高且分泌效果不够理想, 所以研究的重点转向其在真核生物细胞屮的表达。 酵母表达系统 酵母作为单细胞真核生物，既具有原核生物的容易培养、生长繁殖快、相 对易于进行基因工程操作等优点，还具有原核生物缺少的其他优点，如蛋白质翻 译后修饰和加工以获得有生物活性的重组蛋白，表达量和分泌量较大，易于产业 化培养，非常适合口蛋口及其他非糖基化血浆蛋口的大规模制备。 研究者们用到的酵母表达系统有毕赤酵母(Pichia pastoris) ＞酿酒酵母 (Saccharomycescerevisiae)、汉逊酵母(Hansenula polymorpha)、 克鲁维氏酵母 (Kluyveromyces lactis)等。在酿酒酵母屮，Okabayashi等通过构建在染色体LEU2 和HIS4位点上整合的质粒获得能连续分泌rHSA的稳定转化株，每升培养基达到 85mg rHSAo 毕赤酵母表达量和分泌量高且稳定，自身分泌蛋口量小，作为基因表达系统 研究和使用的最多，已基本掌握其生长规律及大规模高密度发酵技术，被认为是 最有发展前景的蛋白质生产工具么一。毕赤酵母非常适合人血白蛋白等非糖基化 血浆蛋口的大规模制备，成为目前rHSA的主要表达系统。 其他表达系统 作为“生物反应器”的转基因动物自1987年以来就引起学者们广泛的关 注。就生产rHSA来说，最理想的表达场所是乳腺，因为乳腺是外分泌器官从而 不会影响转基因动物本身的生理，表达的蛋白能经过充分的翻译后修饰加工，组 织细胞密度高从而分泌水平高，目标蛋白纯化相对容易。2000年黄淑帧等通过 乳腺表达载体构建、显微注射、卵母细胞体外成熟和受精以及整合胚移植等技 术成功将HSA基因整合入牛体内，转基因牛研制的总有效率为12.5%o rHSA在 老鼠的乳腺屮也得到了成功表达且分泌量较高，达到11.9g/L。但该表达系统存 在病毒及月元病毒污染的风险，在产业化Z前还有很多困难需要克服。 国内外也有转基因植物生产rHSA,但是该系统要实现产业化，需要克服植 物合成的非人类糖可能导致免疫原性、［□野或温室等标准操作规范等问题。 (4)各种系统表达重组人血白蛋白的比较 表达系统 总成本 产品周期 规模化生产的能力 产品性能 污染风险 存储成本 细菌 低 短 高 低 内毒素 屮 酵母 屮 中 高 极高 低 低 转基因动物 高 极长 低 极高 航病毒和 致癌病毒 高 转基因植物 I 长 侏 4?与HSA相比的相对优势 目前该技术主要以酵母做为蛋白表达式生产，具有以下显著特征： 一是，rHSA与HSA的结构一致，临床疗效也相同。 二是，「HSA是利用现代生物发酵技术生产的白蛋白产品，不仅可提高产品 的纯度，而且其质量明显优于血源提取物。 三是，采用基因重组方法生产白蛋白可实现大规模工业化生产，产量不受资 源限制，