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提蛋白及WB的步骤
整个过程细胞或蛋白都必须放冰上
准备工作:前一天准备:借钥匙、检查细胞裂解液相关试剂是否充足、
当天准备:洗玻璃板、开紫外,冰块、碎冰、标记1.5ml离心管及0.6ml离心管、细胞刮板、开低温高速离心机
细胞裂解液配制:
1mlcelllysis
10ulNP-40(离心机后)
25ul焦磷酸钠
40ulNaF
1ulβ-甘油磷酸
2ulNa3VO4
1ul蛋白酶抑制剂(用完即放回冰箱)
10ulPMSF(最后加,随加随用,有毒)
细胞裂解和收集
观察细胞状态,并准备提蛋白:吸走培养基、用PBS洗细胞两次(倾斜贴壁加PBS,左右轻轻摇),倾斜
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