(食品科学专业论文)鲫鱼肝胰脏中胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的分离纯化及性质研究.pdfVIP

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  • 2021-07-22 发布于湖北
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(食品科学专业论文)鲫鱼肝胰脏中胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的分离纯化及性质研究.pdf

学术诚信声明 兹呈交的学位论文,是本人在导师指导下独立进行的研究工作及取 得的研究成果。除文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其 他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。本人依法享有和承担由此 论文产生的权利和责任。 声明人(签名):哥切钎 时间k刁年占冈D目.I 保护知识产权声明 本人完全了解集美大学有关保留、使用学位论文的规定,即:学校 有权保留送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅,可以采用 影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意集美大学可以 用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。 作者(签名): 导师(签名): 杨f遂、 时间:洲屏 I 鲫鱼肝胰脏中胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的 分离纯化及性质研究 摘 要 3.4.21.1)是丝 胰蛋白酶(Trypsin,EC3.4.21.4)和胰凝乳蛋白酶(Chymotrypsin,EC ‘氨酸蛋白酶家族中的主要水解酶,也是肽链内切酶。胰蛋白酶专一裂解碱性氨基酸残基 残基羧基侧链的肽键。胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶不但在鱼体内起着重要的生理功能,而且 在低温下具有较高的酶活性,是具有潜在重要应用价值的工具酶。目前,国内外关于鱼类 胰蛋白酶的研究较多,但对胰凝乳蛋白酶的研究却很少。本课题首次以淡水鲫鱼为研究对 象,对其肝胰脏中胰凝乳蛋白酶和胰蛋白酶进行了分离纯化,研究其酶学性质,并制备了 抗胰凝乳蛋白酶和胰蛋白酶多克隆抗体,为今后研究淡水鱼胰凝乳蛋白酶和胰蛋白酶的生 理功能以及这类酶在生物、医药以及食品加工中的应用提供了理论基础。 本课题分离纯化胰凝乳蛋白酶和胰蛋白酶的方法包括硫酸铵分级盐析、 DEAE.Sepharose阴离子交换层析、Sephacryl B)和一种阴离子 型胰蛋白酶。 SDS—PAGE和Native结果表明ChymotrypsinA、Chymotrypsin A、Chymotrypsin 到了高度纯化。SDS.PAGE显示Chymotrypsin 为28kDa、27kDa和21 A、 B的最适温度分别为400C和50 8.5;当 Chymotrypsin oC,最适pH值分别为pH7.5和pH 8.5。 ChymotrypsinA、Chymotrypsin 强烈抑制,并且两种酶的抑制效果相似。Trypsin底物特异性实验表明,该酶对荧光底物 A、Chymotrypsin Boc—Gln-Arg—Arg—MCA的分解能力最强。Chymotrypsin B的‰值分别为1.4和O.5 pmol/L,所对应的‰值分别为2.7和3.4 A和 值和‰值分别为0.8ttmol/L和203.5s~。免疫印迹实验表明,Chymotrypsin ChymotrypsinB可以与抗鲫鱼Chymotrypsin 抗体呈阳性反应。 关键词:胰蛋白酶,胰凝乳蛋白酶,鲫鱼,纯化,免疫印迹,同源性,性质研究 Purificationandcharacter

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