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核酸提取方法的研究进展 核酸提取方法的研究进展 核酸提取方法的研究进展 张　丽1，2，杨莲茹1，吴绍强2 （1. 内蒙古农业大学兽医学院，内蒙古呼和浩特 010018；2. 中国检验检疫科学研究院，北京 100029） 摘　要：系统详细的阐述了核酸提取过程中针对细胞裂解和核酸纯化两大关键步骤的各种研究方法，包括对组织细胞裂解的胍盐裂解法、碱裂解法、CTAB 裂解法以及酚抽提法等，和纯化采用的固相基质：二氧化硅基质、磁珠和阴离子交换介质。阐明了各种方法的技术原理以及优缺点，以及各技术在实践中的应用发展情况。　　关键字：DNA ；RNA ；提取；纯化；进展 中图分类号：Q52 文献标识码：B 文章编号：1005-944X （2021）12-0075-04 核酸的分子生物学技术是进行病原微生物检测，物种鉴定，物种起源、多样性评估及其亲缘关系、系统进化等常用研究手段之一[1]。然而，能否提取出高质量的核酸分子则是核酸分子生物学试验中关键，提取方法的灵敏度、特异性也将直接关系到后续试验的成败。 1869年，瑞士医师Friedrich Miescher首例成功的进行了核酸提取[2]。起初，他关注于组成白细胞各种蛋白质，并指出蛋白质是细胞质的主要成分。但在随后的测试试验中发现，当加入酸性溶液时溶液中生成一种沉淀物，再加入碱性溶液时沉淀继而溶解消失。Miescher 首例提取出粗糙的DNA ，Miescher 成功从细胞中提取出DNA 后，一些研究者纷纷效仿，并在材料、试剂的应用上进行了不断的探索，由此发展了许多核酸的生物分子提取技术。现如今，从硫氰酸胍盐-苯酚-氯仿提取法到柱纯化技术，已被广泛地用于DNA 和RNA 的提取。 核酸提取的关键在于组织细胞的裂解和核酸纯化两大步骤，本文据此对核酸提取的研究进展进行分析和讨论。 1　组织细胞裂解方法 基金项目：质检公益性行业科研专项（202110132） 组织细胞裂解提取核酸的方法主要包括胍盐裂解法、碱裂解法、CTAB 裂解法以及酚抽提法等。1.1　胍盐裂解法 胍盐是蛋白强变性剂，核酸提取一般采用高浓度的胍盐来裂解细胞，促使核蛋白体解离，同时高浓度的胍盐能使细胞内核酸酶失活，使释放出的核酸不被降解。1977年，Ulrich 等[3]首次使用异硫氰酸胍从总RNA 中分离纯化出mRNA 。该方法特点是利用多数真核细胞中 mRNA 的3 端有 polyA 尾巴，使用oligo （dT ）—纤维素亲和层析法，从总RNA 中分离纯化出mRNA ，但此方法费时费力。在 Ulrich 研究的基础上，1979年 Chirgwin 等[4]发明了一种破裂细胞膜但不破坏核苷酸的方法，即先将组织在异硫氰酸胍和β-巯基乙醇中混合均匀，然后通过乙醇抽提或氯化铯梯度超速离心来分离纯化细胞中的RNA 。该技术是首次能特异性分离RNA 的方法，但还是存在诸多缺点，比如耗时长、效率低，并且由于采用苯酚等毒性有机溶剂，操作有一定的风险性。到目前为止，虽然在此基础上发展出了很多核酸提取技术，但均没有克服耗时长、危险性大等诸多弊端。 伴随着生物产业的商业化发展，很多试剂公司依此设计研制出了很多商品化试剂，如 TaKaRa 公司的 那些内容交叉重复甚或矛盾的部分进行彻底清理，内容陈旧的标准进行更新修订，过期或不适用的标准进行作废处理，缺失的标准加紧制修订，使我国的标准制修订工作逐步进入一个有序状态，按计划进行。参考文献： [1] 马贵平，史喜菊，李冰玲，等. 多种动物共患传染病诊断的国家标准、行业标准与国际标准的比较及适用性评估[J].中国动物检疫，2021，27（10）：66-69. [2] 史喜菊，马贵平，李冰玲，等. 牛传染病诊断的国家标准、行业标准与国际标准的比较及适用性评估[J].中国动物检疫， 2021，27（11）：64-67. 史喜菊，马贵平，刘全国，等. 猪传染性疾病诊断的国家标准、行业标准与国际标准的比较及适用性评估[J].中国动物检疫，2021，28（12）：72-75. DNAiso Reagent，该试剂中含高浓度的胍盐，可从动物组织、植物材料、各种微生物、培养细胞中简单、快速的提取基因组DNA ，且获得的基因组DNA 纯度高、完整性好。整个操作过程也不使用苯酚等毒性有机溶剂，实验危险性小。1.2　碱裂解法 碱裂解法是从E.coli 中分离制备质粒DNA 常用的方法之一，已有30多年的发展历史。1979年，Birnboim 和Doly 成功用碱性裂解液快速提取筛选重组质粒DNA [5]。该方法基于染色体DNA 与质粒DNA 变性与复性的差异而达到分