实验二双缩脲法测定蛋白质.pptxVIP

实验二 双缩脲法测蛋白质含量一、分光光度技术的基本原理（一）光的基本知识光属于电磁波，具有二重性，即不连续的微粒性和连续的波动性。自然界中存在各种不同波长的电磁波，分光光度法所使用的光谱范围在200nm～10μm之间。 其中200～400nm为紫外光区，400～760nm为可见光区，760～10000nm为红外光区。可见光因波长不同而呈现不同的颜色，这些不同颜色的电磁波称为单色光，单色光并非单一波长的光，而是一定波长范围内的光，太阳及钨丝灯发出的白光，是各种单色光的混合光（复合光）。 利用棱镜可将白光分成按波长顺序排列的各种单色光，即红、橙、黄、绿、青、蓝、紫等。一切物质都会对某些波长具有吸收的性质，而物质对不同波长的射线，表现为不同的吸收现象，这一性质称为选择性吸收。有色溶液之所以呈现不同颜色，就是由于这种对光的选择性吸收所致。物质的吸收光谱与它们本身的分子结构有关，不同物质由于其分子结构不同，对不同波长光线的吸收能力也不同，因此每种物质都具有其特异的吸收光谱，在一定条件下，其吸收程度与该物质浓度成正比，故可利用各种物质的不同的吸收光谱特征及其强度对不同物质进行定性和定量的分析。分光光度技术，主要是利用物质特有的吸收光谱来鉴定物质性质及含量的技术，其理论依据是Lambert和Beer定律。 （二）吸光度与透光率 当一束平行单色光照射到任何均匀、透明的溶液时，光的一部分被吸收，一