实验九血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳附件.pptxVIP

实验九：醋酸纤维素薄膜电泳;一、实验目的;二、实验原理;三 实验试剂; 醋酸纤维素薄膜电泳： １、薄膜的准备：薄膜在毛面距短边１．５ｃｍ处用铅笔轻轻划一条点样线。浸入电泳缓冲液，充分浸泡，３０分钟左右。（取出膜片并用滤纸吸去多余的缓冲液，不可吸得过干） ２、电泳槽准备：电泳槽里加入缓冲液，用两张大滤纸的一端铺在电泳槽支架上，另一端浸入缓冲液。（滤纸桥）待滤纸吸饱缓冲液后，用玻璃棒轻轻擀走气泡，使粗滤纸紧贴在支架上。 ;３、点样：用玻璃棒蘸取血清少量，??载玻片短边中央的一段轻轻涂布适量血清，均匀点压在纤维素薄膜加样线上，使血清渗透到薄膜内，形成均匀直线。 ４、电泳：用镊子将薄膜加样的毛面向下搭在滤纸桥上，点样端在负极。薄膜与滤纸桥要垂直，中间不能下垂。电泳：100V,60min,从负极向正极移动。 ５、染色：用镊子取出薄膜，置染色液中５分钟。(一般蛋白质染色常使用氨基黑和丽春红，糖蛋白用甲苯胺蓝或过碘酸-Schiff试剂，脂蛋白则用苏丹黑或品红亚硫酸染色);６、漂洗：在漂洗液中漂洗至背景蓝色退去，即可取出。吹干，观察。(对水溶性染料最普遍应用的脱色剂是5％醋酸水溶液。为了长期保存或进行光吸收扫描测定，可浸入冰醋酸：无水乙醇＝30:70（V/V）的透明液中。) 五、实验结果 六、结果分析： 　　1.点样量大小、均匀程度、点样位置、电泳时间、电泳电压、染色、脱色效果等方面分析。