肿瘤自杀基因治疗及中药方药的增效作用和机制.pptx

肿瘤自杀基因治疗及中药方药的增效作用和机制主讲人：杜标炎广州中医药大学课题资助情况 国家自然科学基金（编号30572433; ）广东省科技攻关计划（编号：2005B3030102 ）广州市科委（编号：2002J1-C7401）广东省中医药管理局（编号：A401028；1050079）广州中医药大学(K0050031) 内 容 研究背景及研究思路HSV-tk/GCV肿瘤自杀基因治疗系统的构建中药方药对肿瘤自杀基因治疗的增效作用中药方药增效作用的机制肿瘤自杀基因治疗系统的改进工作研究背景及研究思路基因治疗的概念基因治疗就是将外源性基因导入到正常或病变细胞中，利用其转录或翻译产物发挥治疗作用的一种方法基因治疗的策略基因治疗的临床试验肿瘤的基因治疗恶性肿瘤由于患者来源广，用于治疗的基因多，容易复制动物模型等原因而成为首选对象 目前常用的肿瘤基因治疗方案 肿瘤的免疫基因治疗肿瘤抑制基因治疗 自杀基因治疗（最有应用前景） 肿瘤多药耐药性基因治疗 抑制血管生成的基因治疗自杀基因的概念 所谓自杀基因是指在一定条件下，可以引起细胞自动死亡的基因 目前研究的多数自杀基因是通过编码病毒或细菌的酶介导敏感性，这些酶能把药物的无活性形式转化为毒性代谢产物，引起细胞死亡基因名称底物产物旁杀伤效应备注单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSV-tk）GCV，ACV，PCV，BCV，BVDU，BVDC，IVDU等核苷类似物磷酸化的核苷类似物有研究最多已上临床水痘带状疱疹病毒胸苷激酶（VZV-tk）araMaraATP－?大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（EC-CD）5-FC5-FU有已上临床大肠杆菌硝基还原酶（NTR）CB1954，MTZ，NFT羟胺衍生物有研究正在兴起大肠杆菌黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶（EC-XGPRT或gpt基因）6TG6TX6-硫代鸟嘌呤酸有?细胞色素P450 CYP 2B1CPA，IFA碱性化的底物有?细胞羧肽酶G2（CPG2）CMDA芥类药物有?大肠杆菌DeoD 基因（PNP）Mep-dr6-甲嘌呤有?白细胞介素1β转化酶（ICE）RARP，Lamins Rb，U1-70kD等被降解失活的底物－?p53－－有?目前应用于实验室和临床主要的自杀基因治疗系统 自杀基因治疗的优势①特异性杀伤基因表达细胞②杀伤多药耐药性（MDR）肿瘤细胞③基因的表达只需将一定量的前药转换成足以杀伤肿瘤细胞的剂量即可，而无需基因的长期表达④绝大部分自杀基因存在极明显的“旁杀伤效应”，体外只需有10％以上的肿瘤细胞表达自杀基因，就可以杀伤绝大部分甚至全部肿瘤细胞⑤良好的瘤苗 旁杀伤效应 旁杀伤效应作用机制 “缝隙连接”机制 免疫介导机制 “细胞凋亡”机制 介质机制 抗肿瘤血管生成 缝隙连接机制免疫介导机制大量抗原释放免疫细胞浸润细胞因子释放1死亡tk+免疫抑制免疫激活免疫炎症系统介导的非特异性杀伤诱发特异性抗肿瘤免疫反应旁杀伤效应增强2免疫增强死亡“细胞凋亡”机制自杀基因引起细胞死亡的形式为细胞凋亡tk+细胞凋亡形成凋亡小体为tk-细胞吞噬引起tk-细胞死亡细胞死亡tk-细胞介质扩散 5-Fc5-FuCDCD-细胞死亡5-Fu5-Fu5-Fu抗肿瘤血管生成注： 自杀基因单纯自杀基因治疗存在主要问题目的基因转染率低而杀伤力不足；缺乏靶向性，自杀基因的表达缺乏组织特异性和时序性等，单纯自杀基因治疗难以完全消除肿瘤细胞肿瘤自杀基因疗法的增效方法 双自杀基因治疗 联合治疗 联合免疫基因治疗 联合放射治疗 联合化学治疗 联合其他基因 靶向基因治疗 增强旁杀伤效应 研究思路单纯自杀基因治疗载体转染效率低靶向性不够易复发联合治疗增效 肯定的免疫药理作用 多靶点作用 给药方便，价格低廉，毒副作用小或无明显毒副作用联合免疫基因 联合放化疗多基因间互相干扰，难以保证导入基因表达或长期表达；使用病毒载体量增多，潜在毒副作用增大；操作过程复杂，成本较高联合中药方药提高旁杀伤效应增强“缝隙连接”功能增强杀伤敏感性增强免疫功能自杀基因疗法联合中药方药可能是一种更为有效和可行的方案HSV-tk/GCV肿瘤自杀基因治疗系统的构建 技术路线获得目的基因病毒滴度测定酶切酶切鉴定病毒感染胃癌细胞质粒重组斑点杂交鉴定GCV杀伤试验重组质粒鉴定病毒包装和阳性克隆筛选目的基因（tk基因）的获得 由美国匹兹堡大学药理教研室Huang L.教授惠赠，广州军区总医院赵亚刚博士提供 （ pICl9R/MCl-tk质粒）pICl9R/MCl-tk质粒酶切鉴定结果 1 2 3 4 5a：pICl9R/MCl-tk质粒结构图 b：pICl9R/MCl-tk质粒的酶切鉴定电泳图谱 注（b）：1：Marker(λDNA HindⅢ)；