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生物科学与生物技术专业本科 实验技能导论- 生物技术实验器材基本原理及应用 第4章 光学显微镜及以光镜为基础的显微分析仪器 第3节光学显微镜记录技术－ 显微摄影技术(PHOTOMICROGRAPHY) 授课教师：崔泽实 定义： ■将显微镜视场中的微观图像记录为放大 图像的技术。 ■本节主要内容 1. 显微照像装置 2. 环境要求 3. 必要硬件的选择 4. 基本操作步骤 显微照像装置 种类： 胶片尺寸(帧幅) ：35mm ， 16mm(连摄) 120mm, 4 × 5(9 × 11.5cm)， 6 × 9 大片技术难，但图像清晰度优于35mm 控制方式： 全自动 半自动 手 动 全自动显微照像装置应具备：胶片规格选择、测光 面积选择、色温测定、感光度设置、倒易率失效补 偿、曝光方式控制、数据影印等功能。 全自动显微照像装置及相关必备器材 环境等辅助要求 • 无尘。 • 无振动。 • 避免强光照射 - 影响对焦准确性。 • 房间照度不能过强，散射光、照明的眩光透过目 镜会反射到底片上，干扰正常感光 • 无腐蚀性气、物。 • 防潮、防霉。 胶片的选择 BF ：追求分辨率、色彩还原，首选ISO100 甚至更低 FL: 追求敏感度，选ISO400 照像目镜的选择 在物镜的有效放大倍率内，尽量优选低 倍照像目镜。 注意与不同的光学系统在型号上相对 应。例如： OLYMPUS：BH/AH/IM系列 - NFK BX/AX/IX 系列 - PE 不同照像目镜/物镜组合的效果 遵循有效放大原则： EM= NA Obj × 550~1000 物镜× 4 10 40 100 物镜NA 0.13~0.16 0.30~0.40 0.70~0.95 1.25~1.30 有效M 65~160 150~400 350~950 625~1300 选用物镜的基本要求 等级：≥平场消色差Plan Ach 特殊观察法 - 专用物镜 荧光：B、G激发可用≥ Plan Ach 可与DIC物镜或FLUOR/PHASE互用 N.A值：为获得较好焦深、对比度，≥40× ，可稍小 些，或选用带光阑调节的物镜(暗场、荧光) 覆盖差：盖玻片≥± 0.3mm(S=0.17),可选用装有校准 环的物镜。 涂片：NC物镜。 聚光镜的选择 等级：≥平场消色差 Plan Ach 与低倍物镜的对应：≤ 4× →摇出式或超低 倍率聚光镜。 最好要带NA值标线。 滤光片的选择 据胶片类型要求，转换色温 (2)色补偿滤光片(CC) →色温平衡(转换)滤光片 镜像中的某种偏色可用其互 (1)光源色温转换/胶片 补色消除： 光源色温: 利用光的原色及补色 2800 °K(钨)~3400 °K ( 卤素) 灯光型(LBT TUNGSTEN)→3400 日光型(LBD，DAYLIGHT→5500 黑体辐射 色温补偿滤光片 显微照像常用的几种滤光片： • 吸热