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浙贝母主要栽培品种类型花粉形态和染色体核型探究 ［摘要］目的：了解浙贝母主要栽培品种类型花粉 形态及染色体核型的差异。方法：应用扫描电镜对3个浙贝 母栽培品种的花粉形态进行了观察和比较，并采用常规压片 技术分析了其体细胞染色体数目和核型。结果：3个浙贝母 栽培品种中狭叶浙贝的花粉粒呈卵圆形，宽叶和多籽浙贝的 花粉粒呈椭圆形，三者在网脊宽度及网眼大小等方面存在明 显差异；3个浙贝母栽培品种的核型公式分别为：狭叶浙贝 2n=2x=3m+lsm+8st ( 2SAT ) +12t ( 4SAT )、宽 叶浙贝 2n=2x=2m+2sm+10st ( 2SAT ) +10t ( 2SAT )、多籽浙贝 2n=2x=24=2m+2sm+5st (2SAT) +15t (4SAT),核型类型均为 “3E”型，狭叶和多籽浙贝的同源染色体存在杂合现象。结 论：浙贝母种内的遗传多样性水平丰富，高的遗传多样性能 够增强浙贝母的适应性，为浙贝母新品种选育奠定基础。 ［关键词］浙贝母；品种类型；花粉形态；核型分析；遗 传多样性 浙贝母Fritillaria thunbergii Miq.别名浙贝、大贝、 象贝、元宝贝、珠贝，是我国传统的大宗药材，被列为“浙 八味”之首，历版《中国药典》均有收载。具有清热散结， 化痰止咳的功能［1］。浙贝母原产于浙江宁波象山，少有野 生，野生资源分布于天目山脉。目前药材来源于人工栽培， 其主产地分布于浙江、江苏，福建、江西也有少量种植，其 中浙江主产于郵州、磐安、缙云等地，江苏主产地主要有南 通、苏州、泰州等地［2］。 在长期人工栽培过程中，浙贝母出现了许多变异类型， 如狭叶贝母、宽叶贝母、多籽贝母。在浙江、江苏产地调查 发现，狭叶浙贝种植面积最广，占90%以上，并于2007年被 浙江省非主要农作物品种认定委员会认定为浙贝1号［3］, 而宽叶和多籽浙贝种植较少。狭叶、宽叶浙贝的产量显著高 于多籽浙贝，但多籽浙贝的繁殖系数大于其他2种浙贝，多 籽浙贝一般每株有3个或4个相对较小的鳞茎，而狭叶与宽 叶浙贝母每株只有2个。崔培章［4］研究表明，多籽贝母光 合强度、生物碱含量方面表现也更为优异。关于浙贝母的胞 粉学及细胞学研究，已有相关报道［5-9］,但这些研究并未 深入到浙贝母栽培品种，且报道的浙贝母核型公式有较大差 异。为此，本文对狭叶、宽叶及多籽浙贝进行了花粉形态和 核型研究，旨在了解其种内遗传多样性，以期为浙贝母进行 种质资源的评估和新品种选育提供参考依据。 1材料 2011年在浙江省鄭州区收集3个浙贝母栽培品种:狭叶、 宽叶及多籽浙贝，由南京农业大学中药材研究所王康才教授 鉴定为浙贝母F. thunbergiio分别种植于南京农业大学校 内实验基地，栽培管理措施一致。花期取3种浙贝母即将开 放的花蕾和生长旺盛的根尖作为实验材料。 2方法 2. 1花粉形态观察 取成熟而未开裂的新鲜花药，将花粉直接抖入到小瓶 中，然后用双面胶带将花粉粘在小金属台上进行喷金处理， 在扫描电子显微镜（日立S-3000N型）下观察并照相记录。 选择20个有代表性的花粉粒，用粒径计算软件Nano Measurer测量获得花粉极轴长、赤道轴长、网眼直径和网脊 宽度。 2. 2核型分析 于上午9： 30—11： 30取新生的根尖，用饱和对二氯苯 溶液预处理6 h,然后转入卡诺固定液（无水乙醇-冰醋酸 3 : 1）中固定20 h,蒸馆水冲洗，用1 mol?L-1的盐酸在 60 °C恒温下解离5 min,改良卡宝品红染液染色，按照常规 方法压片，Olympus BX51荧光显微镜下观察并拍照。每种材 料均选用5个分散良好的中期分裂相进行分析测量，取平均 值，得到核型数据。核型分析按李懋学等［10］确定的标准进 行；染色体的相对长度、臂比及类型遵循Levan等［11］的命 名系统；核型类型参照Stebbins［12］标准；核型不对称系数 （As ? k%二长臂总长/全组染色体总长）用Arano［13］的方法。 3结果与分析 3. 13个栽培品种浙贝母花粉形态 浙贝母种内的花粉形态有很多相似之处：花粉粒均为单 粒，两侧对称，具远极单沟，沟长及达两端；在扫描电镜下 可见花粉表面有清晰的网状纹饰。 3. 1. 13个栽培品种浙贝母花粉形状和大小狭叶浙贝大 小为31. 36 umX65. 47 nm ,宽叶浙贝大小为27.4 UmX64. 13 urn,多籽浙贝大小为 28. 64 LimX66. 80 um。 不同栽培品种浙贝母极轴长虽相近，但赤道轴长差异显著， P/E值（2.09?2. 34）差异明显，其中狭叶种浙贝P/E值最 小，赤道面观为卵圆形，宽叶种与多籽种浙贝P/E值较大， 赤道面观为椭圆形。 3. 1.23个栽培品种浙贝母花粉表面纹饰扫描电子显微