分子细菌学与分子免疫学.ppt

动物免疫学实验;酶联免疫吸附实验;精品资料; 你怎么称呼老师？ 如果老师最后没有总结一节课的重点的难点，你是否会认为老师的教学方法需要改进？ 你所经历的课堂，是讲座式还是讨论式？ 教师的教鞭 “不怕太阳晒，也不怕那风雨狂，只怕先生骂我笨，没有学问无颜见爹娘 ……” “太阳当空照，花儿对我笑，小鸟说早早早……”;实验原理;;实验原理;实验原理;实验原理;实验原理;;;;;;;乙肝二对半检查，或称乙肝五项检查 ;实验步骤 ;实验步骤;注意事项 ;ELISA应用的范围很广，而且正在不断???扩大，原则上ELISA可用于检测一切抗原、抗体及半抗原，可以直接定量测定体液中的可溶性抗原。酶免疫试验（EIA）结合光学显微镜或电子显微镜可进行抗原定位与结构的研究，用酶标记抗原或抗体结合免疫扩散及免疫电泳可提高试验的敏感性。在实际应用方面可作疾病的临床诊断、疾病监察、疾病普查、法医检查、兽医及农业上的植物病害的诊断检定等。因此，它和生物化学、免疫学、微生物学、药理学、流行病学及传染病学等方面密切相关 。;(一):检查抗原和半抗原方面 1.内分泌方面已经用于检测雌性激素、绒毛膜促性腺激素、黄体素、胰岛素、皮质醇、促甲状腺素和孕酮等，其敏感性与RIA相当 2.在血液学方面可用于检查凝固因子（如第Ⅷ凝固因子）、红细胞抗原及结合球蛋白（Hapto Globin）等 3.在肿瘤方面已试用检查甲胎蛋白（AFP）癌胚抗原（CEA），对前者的敏感性已达到与放射免疫试验相当的水平，但对CEA检查的敏感性较低，目前尚不能用于常规诊断 ;4.在传染病的诊断方面正在日益扩大，其中最满意的是用于检查乙型肝炎表面抗原 5.在免疫化学方面可用于检测白蛋白，免疫球蛋白的各种组份，也可用于检测补体成份，还能用于检测蛇毒。 6.还可用于植物组织浆液中检查植物病毒。此外尚试用于测钩体抗原及血吸虫病的循环抗原等。 ;(二):检查抗体方面 用ELISA间接法检查抗体，已获得对多种传染病和寄生虫病的血清学诊断，亦开始广泛用于现场流行病学调查。 1.在寄生虫病方面，它用于对疟原虫、阿米巴、利日曼原虫、锥虫、血吸虫、囊虫、弓浆虫、肺吸虫、肝吸虫、血丝虫、旋毛虫病等血清学诊断，这对人医和兽医都很重要。 2.在病原微生物方面已用于检查链球菌、沙门氏菌、布氏杆菌、结核杆菌、麻疯杆菌、霍乱弧菌、淋球菌、假丝酵母菌等的抗体，还可用于破伤风抗毒素和霍乱弧菌抗毒素的测定以及检测斑疹伤寒立克次氏体感染后的抗体，可作诊断 ;3.试用于病毒抗体检查报告的有：流感病毒、腮腺炎病毒、麻诊、风疹、轮状病毒、疱疹病毒、巨细胞病毒、EB病毒、腺病毒、肠道病毒、脑炎病毒、黄热病毒、狂犬病毒和脊髓灰质炎病毒等，其敏感性都超过目前常用的检查方法 此外，还可用于鉴定病毒型别，例如疱疹病毒。如能进一步改进方法用于检查特异性IgM，可以作为早期诊断以及了解体内有关抗原的清除情况。 4.在免疫性疾病方面有试用作自身疫病抗体测定以及对过敏的诊断，例如检测各种过敏原的抗体、DNA抗体及甲状腺球蛋白抗体，红斑性痕疮抗体等等。 5.在卫生学方面，可用于检测食品中葡萄球菌肠毒素及沙门氏菌毒素等等。 ;ELISA存在的问题 ;2、内源性过氧化酶的普遍存在，如人脑组织中，呼吸道分泌物的炎症细胞中及某些病毒的组织培养中均有内源性过氧化物酶的活力，常不易除去，如果用某些方法除去时，则病毒 的抗原性亦受到破坏，对于用ELISA检测不利。 3.对ELISA法的非特异性评价的资料尚不够完善，因此，对出现一些非特异性反应的时候，往往不易解释。;4.固相载体的质量常不统一，主要是原料及制备工艺还不一致，致使不同批号的固相载体有时本底值较高，有时吸附性能很差，影响试验结果。 5.试剂不统一，现在处于“八仙过海，各显神通”，标准还不能统一。 ;对一种新方法的建立和深入研究，要采取一分为二的方法加于评价，既要看到方法的优点，也要重视存在的问题，便于进一步研究加以克服。世界卫生组织专家组提出对ELISA的评价认为：“ELISA作为免疫诊断应用是一个好办法，但要做好它不容易。”因此，还需进一步研究改进，加以完善。从而使之成为对多种疾病诊断较为理想的方法是完全可能的。 ;ELISA的影响因素;;;;;;;;;;;;;