诊断试剂的原理及市场运用.pptxVIP

主 要 内 容 脆性X综合征检测试剂白血病BCR-ABL1检测试剂盒 Y染色体微缺失检测试剂盒 结直肠癌微卫星不稳定(MSI)检测 21三体综合征快速检测试剂盒脆性X综合征的研究背景脆性X综合征(fragile X syndrome，FXS)发病率：男性为1/4000-9000，女性为1/7000-15000。发病率仅次于唐氏综合征。据统计，目前世界范围内智力低下的人群中５％左右是由脆性Ｘ基因引起的。脆性X综合征临床主要表现：（1）程度不等的智力低下；（2）巨睾丸；（3）特殊面容；（4）自闭症（5）语言发育障碍以及行为异常(如注意力集中时间短、拍手、目光接触回避)。脆性X综合征的作用机理脆性X综合征是由于FRM1基因异常引起的。该基因位于染色体X上。5 ’UTR有一段CGG重复序列，在其上游250 bp左右有一个CpG岛。1991年Verkerk等现了FXS相关致病基因FMR-1，提出FMR-1基因内(CGG)n重复序列的不稳定性扩展及其上游CpG岛的异常甲基化是导致该病的分子基础。FMR1基因序列异常FMR1蛋白表达异常影响脑部有关智力发育脆性X综合征脆性X综合征的作用机理FMR1基因的CGG重复数是目前研究的重点负面作用导致结果临床表现前突变型（Premutation）：无表现临床症状，但约有2O% 的前突变型FXS女性携带者易发生“脆性X原发性卵巢功能不全(FX-POI)”，而部分前突变型FXS男性携带者在其老年时期易发生“脆性X相关震颤-共济失调综合征（FX-TAS) ” 。全突变型（Full Mutation）：男性100 %表现临床症状，女性则依据x染色体失活的不同而表现程度不等的临床症状。常用检测FMR1的方法及局限1.Southern杂交：“Southern杂交”存在下问题：（1）耗时（~1周时间）、耗费人力、费用高；（2）基因组DNA需要量大，5-10μg，是PCR法的175倍；（3）CGG重复数定量不准；（4）嵌入混合型突变（例如：前突变+全突变等位基因）影响Southern杂交的灵敏性。2.普通PCR法：CGG重复区域的“GC”含量非常高，G C三键打开难度大，扩增非常难。普通的PCR法很难扩增出片段，既使有片段也很短。而且每次扩增的结果可能存在差异。AmplideX FMR1 技术优势一、独创两种互补的PCR体系,检测各种复杂病例二、灵敏度非常高三、CGG重复引物扩增可辨女性纯合子、杂合子四、CGG重复引物扩增可发现“AGG”嵌入五、准确计算出CGG重复数六、检测结果100%可重复正向引物+反向引物+CGG重复引物FMR1反向FAM标记引物CGG重复引物CpG250bp左右CGGCGGCGGCGGCGGCGGCGGFMR1正向引物灵敏度非常高在检测全突变FM方面，Asuragen FMR1 PCR 试剂盒的灵敏度是Southern杂交的5倍。上样量对比：Southern杂交的：7μgGene-specific FMR1 PCR：40ngSouthern杂交是Gene-specific FMR1 PCR的175倍。以上样量与灵敏度推算：5×175=875， 本试剂盒的灵敏度是Southern杂交的875倍。可辨别女性纯合子、杂合子AB纯合子：第一个高峰之后，无CGG扩增产物峰出现，如图A杂合子：最长片段（高峰之后），之后还会出现一个高峰，如图B。可发现“AGG”嵌入每插入一个AGG，导致4个峰缺失。若用Southern，可能因为AGG的插入，致使探无法与DNA片段结合，影响结果准确性。准确计算出CGG重复数上游250bp（CpG岛）出处始扩增检测结果100%可重复3个不同实验室，不同时间点，不同测序仪器重复性测试3个不同实验室2种测序仪：3130xl和3500xl6个等位基因（20,29,31,54,119,199）实 验 流 程试剂盒成份(76008) 实验室需具备的条件CML的研究背景慢性粒细胞白血病(Chronic Myeloid Leukemia, CML)是一种造血干细胞异常的克隆性恶性疾病，占成人白血病的15~20%。慢性粒细胞白血病主要依靠血常规、骨髓穿刺活检来诊断的；表现为外周血白细胞异常升高和骨髓大量的白血病细胞堆积。慢性粒细胞白血病的病因仍未明确，但认为费城染色体与该病密切相关，大约有90至95%的病人出现费城染色体。BCR-ABL1有三种变体：b2a2、b3a2和e1a2。白血病BCR-ABL1检测试剂盒CML的治疗方法主要有酪氨酸激酶抑制剂（TKI）药物（Imatinib、Dasatinib和Nilotinib等）治疗、骨髓移植、干扰素治疗、中医院治疗等；BCR-ABL1 QuantTM Test是定量检测BCR-ABL1与ABL1表达量比值的体外诊断产品，用以监测CML的治疗效