高中生物血红蛋白提取与分离课件新人教选修.pptVIP

课题3　 血红蛋白的提取和分离;课标领航 1．概述凝胶色谱法、电泳法等分离大分子的基本原理。 2．能根据凝胶色谱过程中的现象和结果，评价实验操作的过程是否规范，分析实验结果。 3．尝试对血液中血红蛋白的提取和分离，体验从复杂的体系中提取生物大分子的基本过程和方法。 【重点】　凝胶色谱法、电泳法基本原理。 【难点】　实验操作的过程及分析。;情境导引 为年老多病的人注射丙种 球蛋白，可以在一定程度上增强 其身体的抵抗力。在动物体内， 丙种球蛋白和许多蛋白质混合 在一起。要获得纯净的丙种球蛋 白制品，就必须进行提取和分离。 电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小、形状的不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现了样品中各种分子的分离。;蛋白质分离的原理：;（一） 凝胶色谱法;;;3、原理：当不同的蛋白质通过凝胶时，相对（ ）的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程（ ），移动速度（ ），而（ ）的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在（ ）移动，路程（ ），移动速度（ ），相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。;; 1、概念：在一定的范围内，能对抗外来少量强酸、强碱或稍加稀释不引起溶液PH发生明显变化的作用叫做缓冲作用，具有缓冲作用的溶液叫做缓冲溶液。;3、缓冲溶液的配制;思考：在血红蛋白整个实验室中用的缓冲液是什么？它的目的是什么？;三、 电泳---血红蛋白的分离鉴定方法;3.类型:;影响蛋白质分子运动速度的因素;; 蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决 于它所带净电荷的多少以及分子的大小等因素。 ;用SDS —聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量的方法;①琼脂糖凝胶电泳操作简单，电泳速度快，样品不需要事先处理；电泳后区带易染色，样品极易洗脱，便于定量测定。 ②测定蛋白质的相对分子质量常用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，这是因为该方法分离蛋白质完全取决于分子的大小，而非所带电荷的性质和分子的大小、形状。;;二、实验操作;血液;每个肽链??绕（ ），此基团可携带（ ）。血红蛋白因含有（ ）而呈红色。本课题可选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液来分离血红蛋白。;2与其他真核细胞相比,红细胞有什么特点?这一特点对你进行蛋白质的分离有什么意义?; 采集得到血液（加入抗凝血剂柠檬酸钠）;;洗涤过程图解：;初次离心后的结果;(2)血红蛋白的释放：;（2）释放血红蛋白;磁力搅拌器;搅拌器正在工作;3.分离血红蛋白溶液：;;用 过滤 ，除去 ，于分液漏斗中静置片刻后，分出下层的红色透明液体。;.分离血红蛋白; 2.粗分离----透析（去除分子量较小的杂质）;取( )ml的血红蛋白溶液装入（ ）中，将透析袋放入盛有300ml的物质的量浓度为20mmol/L的（ ）中，pH为（ ），透析12小时，目的是（ ）或用于更换样品中的（ ）。;;（一）样品处理;（二).凝胶色谱操作----;2.凝胶色谱操作:;装配好的凝胶柱;（2）凝胶色谱柱的装填; ;（3）样品加入与洗脱;注意：正确的加样操作是：1、不要触及并破坏凝胶面。2、贴壁加样。3、使吸管管口沿管壁环绕移动。;; 教材P70：为什么凝胶的装填要紧密、均匀？;(3)样品的加入和洗脱 ①调整缓冲液面：与凝胶面平齐 ? ②滴加透析样品：用量为1 mL ? ③样品渗入凝胶床：样品完全渗进凝胶层 ? ④洗脱：打开下端出口，用磷酸缓冲液洗脱 ? ⑤收集：待红色的蛋白质接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每5 mL收集一管，连续收集;(3）样品加入与洗脱;注意：正确的加样操作是：1、不要触及并破坏凝胶面。2、贴壁加样。3、使吸管管口沿管壁环绕移动。;;;3.样品的加入和洗脱;①调整缓冲液面：与凝胶面平齐 ②滴加透析样品：加到色谱柱的（ ） ③样品渗入凝胶床：（ ） ④再调整缓冲液面洗脱： ⑤收集：待（ ）接近色谱柱底端时收集;收集得到的纯化