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叶绿素检测作业指导书 叶绿素检测作业指导书 PAGE PAGE / NUMPAGESPAGE2 叶绿素检测作业指导书 PAGE 叶绿素检测作业指导书 试剂 碳酸镁悬浮液：称取 细粉末碳酸镁悬浮于 100ml蒸馏水中。每次使用 时，要充分摇匀。 丙酮溶液：在 900ml丙酮中加100ml蒸馏水。 盐酸溶液：量取 83ml盐酸溶于水中，冷却并稀释 至1000ml。 测定步骤 浓缩：在一定量的试样中添加 碳酸镁悬浮 液，充分搅匀后，用直径 60mm的微孔滤膜吸滤。过滤器内 无水分后，还要继续抽吸几分钟。如果要延时提取，可把 载有浓缩样品的滤膜放在枯燥器里冷冻避光贮存。 提取：将载有浓缩样品的滤膜放入研钵中，参加 3ml丙酮溶液至滤纸浸湿的程度， 把滤膜研碎，再少量地 加90%的丙酮溶液，把滤膜完全研碎，然后用90%丙酮溶液将已磨碎的滤膜和丙酮溶液洗入带刻度的带塞离心管中， 使离心管内提取液的总体积不超过6ml，盖上管塞，置于 4℃的暗处浸泡 24h。 离心：将离心管放入离心机中，以 4000r/min 速 度离心别离 20min。将上清液移入标定过的 10ml具塞刻度 管中，加少量 90%丙酮溶液于原提取液的离心管中，再次 悬浮沉淀物并离心，合并上清液。此操作重复 2~3次，直 至沉淀不含色素为止，最后将上清液定容至 10ml。 测定：取上清液于 10mm或50mm的比色池中，以 90%丙酮溶液为对照溶液，读取波长 750,663,645和630nm 的吸光度。选择比色池的光程长度或稀释度，使其光密度 OD663大于小于。 结果表示 从各波长的吸光度中减去波长 750nm的吸光度，作为 已校正过的吸光度 D，按下式计算叶绿素的浓度： Ca=〔 663 645 630〕V1/(V2·L) )V1/(V2·L) 645 663 630 Cc=〔 630 645 663〕V1/(V2·L) 式中: Ca——叶绿素 a的浓度； Cb——叶绿素 b的浓度； Cc——叶绿素 c的浓度； V1——提取液的定容体积； V2——过滤水样的体积； L——比色池的光程长度； D——已校正过的提取液吸光度。