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蛋白质的显色反应 实验二 蛋白质的显色反应 一、实验目的 1、了解构成蛋白质的基本结构单位及主要连接 形式。 2、了解蛋白质和某些氨基酸的呈色反应原理。 3、学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法。 二、呈色反应 1、双缩脲反应 （1）原理： o 尿素加热至 180C 左右，生成双缩脲并放出一分 2+ 子氨。双缩脲在碱性条件下能与 Cu 结合生成紫红 色化合物，此反应称为双缩脲反应。蛋白质分子中 有肽键，其结构与双缩脲相似，也能发生此反应（二 肽和氨基酸都不能发生双缩脲反应）。可用于蛋白质 的定性或定量测定。 反应式如下： NH 2 NH 2 C O C O NH 180 C 2 o NH NH + 3 NH 2 O C C O NH NH 2 2 双缩脲 取少量尿素结晶，放在干燥试管中。用微火加热 使尿素熔化。熔化的尿素开始硬化时，停止加热， 尿素放出氨，形成双缩脲。冷后，加 10%氢氧化钠 溶液约1mL，振荡混匀，再加1%硫酸铜溶液 1 滴， 再振荡。观察出现的粉红颜色。要避免添加过量硫 酸铜，否则，生成的蓝色氢氧化铜能掩盖粉红色。 （由于杂质以及氨气的干扰，导致颜色不都是紫红 色） 向另一试管加2%卵清蛋白溶液（改为蛋清溶液： 水= 1：9）约 1mL 和 10%氢氧化钠溶液约 2mL，摇 匀，再加1%硫酸铜溶液2 滴，随加随摇。观察紫玫 瑰色的出现。 2、茚三酮反应 (1) 原理 蛋白质、多肽和各种氨基酸以及所有 -氨基酸均 能发生该反应 ，除无α -氨基的脯氨酸和羟脯氨酸 呈黄色反应外，其它均生成蓝紫色化合物，最终生 成蓝色化合物。氨、β -丙氨酸和许多一级氨化合 物都有此反应。尿素、马尿酸、二酮吡嗪和肽键上 O 的亚氨基不呈现此反应。因此，虽然蛋白质或氨基 H OH C + HN 酸均有茚三酮反应，但能与茚三酮反应呈阳性反应 C 2 C COOH C OH R 的不一定都是蛋白质或氨基酸。该反应分为两步， O 第一步是氨基酸被氧化脱