多聚酶链式反应扩增DNA片段参考PPT课件.ppt

课题2 多聚酶链式反应扩增DNA片断;一、基础知识;脱氧核苷酸; 一个核苷酸上的磷酸基团上的“－OH”和另一个核苷酸分子的第三位碳原子上的羟基之间失去一分子水，形成磷酸二脂键，即在相邻的两个脱氧核苷酸的3’和5’碳原子之间形成磷酸二脂键。数量庞大的四种脱氧核苷酸通过3’、5’、磷酸二脂键彼此连接起来形成脱氧核苷酸链。通常将DNA的羟基“－OH”末端称为3’端，而磷酸基团的末端称为5’端;脱氧核苷酸结构式;;多聚酶链式反应扩增DNA片段参考PPT课件;5、DNA分子的双螺旋结构;多聚酶链式反应扩增DNA片段参考PPT课件;6、利用碱基互补配对规律的计算;（二）DNA分子的特性; 例题：甲DNA分子中，A和T占25％，G和C占75%，乙DNA分子中，G和C占25％， A和T 占75%，哪一个稳定？;2、多样性;（三）DNA的复制;5、原材料;② RNA引物的合成;⑤ DNA片断的连接;边解旋边复制(过程）;10、精确复制的原因; ①一条双链DNA分子，复制N次，形成的子代DNA分子中，含亲代DNA母链的有两个DNA分子，占子代DNA总数的2/2N；亲代DNA分子母链两条，占子代DNA中脱氧核苷酸链总数的2/2 N+1= 1/2N;（四） PCR(多聚酶链式反应）;多聚酶链式反应扩增DNA片段参考PPT课件;3、 PCR原理;多聚酶链式反应扩增DNA片段参考PPT课件; 高温解决了打开双链的问题，但是，又导致DNA聚合酶失活的问题，耐高温的Taq DNA聚合酶解决了高温导致DNA聚合酶失活的问题，促成了PCR技术的自动化; PCR技术是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。 它具有特异、敏感、产率高、 快速、 简便、重复性好、易自动化等突出 ; ① PCR过程需要的引物不是RNA，而是人工合成的DNA单链，其长度通常为20－30个脱氧核苷酸;（五） PCR的反应过程;靶序列;②复性（退火）;靶序列;③延伸;靶序列;靶序列;循环次数;4、PCR 循环的结果;二、 PCR 的实验操作;PCR仪;微量离心管;1、准备;①过程：盖严微量离心管口的盖子，用手指轻轻弹击管壁;将离心管放入PCR仪上，设置好PCR仪的循环程序;循环数; PCR技术高度灵敏，为了避免外源DNA等因素的污染而造成干扰实验，PCR操作时要注意做到：;（一）理论上DNA扩增数目的计算;2 、过程;④计算;比色杯;四、 课题延伸;五、实验小结