版药典无菌检查法与微生物鉴定.pptVIP

2015版药典无菌检查法与微生物鉴定方法;无菌 是指某一物体或某一环境中不含有活的微生物。 无菌检查法 用于检查药典要求无菌的药品、生物制品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。 无菌操作 是指在无菌环境条件下，在对无菌制品或无菌器械等 进行检验的过程中，能防止微生物污染与干扰的一种常规操作方法。 ; 无菌技术 是指在微生物试验工作中，控制或防止各类微生物的污染及其干扰的一系列操作方法和有关措施，其中包括无菌环境设施、无菌试验器材及无菌操作。 无菌检查法的局限性 由于无菌是一个相对的概念，因此，对无菌检查的结果应该有一个正确的认识－即产品通过无菌检查仅仅意味着在该检验条件下，供试品未发现有微生物污染，并不表示所有的产品都是无菌的。反之，当供试品中检出微生物污染，则可以认为批产品的微生物污染风险相当高。 ;从理论上来说，要确定某批产品的无菌性，应对每个容器进行无菌检查。但是无菌试验对样品是破坏性的，因此不可能对每一最小包装的产品进行检查。 统计概率的局限性 ：对于低污染水平的产品，其局限性在统计学上更为明显。 检验条件的局限： 样品中污染的微生物的检出受多种因数的影响，只有在各检验条件符合污染微生物的修复和生长时，才能保证被检样品的无菌检验结果的准确性。 污染的检出率要比实际产品的污染率低。 ;无菌检查存在检查失误的可能性：这可能是因为污染菌浓度太低，或是污染菌生长太慢，或是因为培养基不良等原因，在培养期间污染菌根本就不生长。产品的染菌率愈小，错判合格的可能性就愈大。 所以在评价某个无菌制品的某个批的无菌状态时，仅依靠最终产品的无菌检查是不充分的，局限性较大。对无菌制品来说，生产最终产品的所有系统的工艺才是最重要的。;2015版中国药典无菌检查法;2015版中国药典无菌检查法的修订;实验环境的修订;修订的依据;2015版中国药典通则;GMP2010年版对洁净度的规定及确认标准 ;无菌隔离系统的使用及验证;13;培养基的修订;比较项目;2010年版;硫乙醇酸盐流体培养基（Fluid Thioglycollate Medium）;大豆胰酪胨??养基(TSB) 改良马丁培养基;2010年版;2010年版;无菌检查方法的整合;无菌检查方法的主要修订;2010年版; 检验数量：是指一次试验所用供试品最小包装容器的数量。成品每亚批均应进行无菌检查。 2015版药典四部通则1101表2，上市抽验样品的最少检验数量，除抗生素和血液制品外，V≥100ml液体制剂的最少检验数量由2010年版药典6瓶/支修订为10瓶/支。即所有上市抽验样品除抗生素和血液制品外的最少检验数量为10瓶/支。增加了供试品检验数量。;25;26;2010年版;菌液制备要点;菌液制备要点;铜绿假单胞菌 [CMCC(B) 10104] 大肠埃希菌 [CMCC(B) 44102] 金黄色葡萄球菌 [CMCC(B) 26003] 生孢梭菌 [CMCC(B) 64941];大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌需氧层厌氧层均生长。 枯草芽孢杆菌仅在需氧层生长。 生孢梭菌仅在厌氧层生长。;取样量的确定;方法适用性试验结果的判断： 与对照管比较，如含供试品的各试验管的实验菌均生长良好，可照此检查法和检查条件进行供试品的无菌检查。 如含供试品的任一试验管的实验菌生长微弱、缓慢或不生长，可采用增加冲洗量、增加培养基用量、使用中和剂、更换滤器品种等方法，重新进行方法验证。;无菌检查法的注意事项;检验方法的选择;供试品无菌检查所采用的检查方法和检验条件应与方法适用性试验确认的方法相同。 无菌试验过程中，若需使用表面活性剂、灭活剂、中和剂等试剂，应证明其有效性，且对微生物无毒性。 ;常用中和剂比例;薄膜过滤法;直接接种法;供试品的无菌检查;供试品的无菌检查;培养和观察;结果判断;实验过程监控;环境微生物归属： 约大于50％的革兰氏阳性菌来自人员；30％的革兰氏阳性芽孢杆菌来自产品外包装；酒精对革兰氏阳性芽孢杆菌无效；革兰氏阴性假单胞菌存在于新洁尔灭中；丁基胶塞会因负压而将消毒剂中的污染菌引入样品。;无菌程序保障;微生物鉴定;微生物鉴定;微生物分类;微生物分类;种：是最基本的分类单位，一大群表型特征高度相似、亲缘关系极其接近，与同属内其他种有明显差别的菌株的总称。 客观存在，相对稳定。 来自共同祖先，有着相近的亲缘关系。 形态、生理特征上表现十分相似。 存在差异和变异。 变异发展到一定程度，即形成新种或变种。 ;变种 ：种内某一个体可能由于突变而发生变异，在自然选择和人工选择下，这种变异会在种内不断扩散，最后形成某些遗传性不同于原种的一个群体。 亚种：指某一明显而稳定的特征与模式种不同的种，有时称小种。 在微生物学中，通