石蜡切片和HE染色.docx

石蜡切片和HE染色 石蜡切片和HE染色 1、 取材 颈椎脱臼处死小鼠，打开腹腔，剪去肝组织（或其他组织）。切取得组织不 宜太大，以利于固定剂穿透，通常以5mm*5mm*2mm或为宜。取卜 所需要的肝组织，切成一小块2-3mm厚。 注意事项： （1）取材动作要迅速，不宜作太久的拖延一面组织细胞的成分、结构等发生变化。 ⑵切片材料应根据需要观察的部位进行选择，尽可能不要损伤所需要的部分。 2、 固定 将切好的肝组织用生理盐水组织洗一下，立即投入4%多聚甲醛中固定，固定 30~50mino 注意事项： ⑴一半固定液，都以新配好为好，配好后应储存在阴凉处，不宜放在口光下，以 免引起化学变化，失去固定作用 ⑵有些混合固定液的成分之间会发生氧化还原作用，一定要在使用前才混合，如 果混合太早，失去时就没有作用了 （3）固定材料时，固定液必须充足，一般为材料块的20-30倍，有些水分多的材 料，中间应更换1-2次新液 ⑷材料固定完成后，保存于严密紧塞或加盖的容器里，同时在容器外加上标签， 并随同材料在溶液中投入相应的标签，一面相互混淆。标签上注明固定液、材 料来源、F1期等。标签上的文字，应用黑色铅笔或绘图黑墨水书写。 3、 脱水 50%-*70%-*80%-*95%-*100%-*100%酒精。每个 0. 5h。 注意事项： ⑴脱水必须在有盖的玻璃瓶中进行，防止吸收空气中的水分 （2） 在更换高一级的脱水剂时，最好不要移动材料以免损坏，可用吸管吸出器皿中 的脱水剂，再用吸水吸尽器皿内剩余液，然后于皿中加入高一级脱水剂 （3） 在低浓度酒精中，每级停留不宜太长，否则易使组织变软，助长材料的解体 （4） 在高浓度或酒精中，每级停留的时间也不宜太长，否则会使组织变脆，影响切 片。 （5） 如需过夜，应停留在70%酒精中 （6） 脱水必须彻底，否则不易透明，以至使透明剂内出现白色浑浊现象。 4、 透明 1/2二甲苯+1/2无水乙醇（20min ） 一纯二甲苯【（15min ） —纯二甲苯II 25min）。由于乙醇与石蜡不相溶，而二甲苯既能溶于乙醇乂能溶于石蜡，所以 脱水后还要经过二甲苯以过渡。当组织中全部被二甲苯占有时，光线可以透过，组 织呈现出不同程度的透明状态。 注意事项： ⑴使用透明剂时，要随时盖紧盖子，以免空气中的水分进入。 ⑵更换每级透明剂，动作要迅速，一方面为了不使材料快干涸，另一方面能避免 吸收湿气。 ⑶在透明过程中，如果材料周围出现白色雾状，说明材料中的水未被脱干净，应 退回纯酒精中重新脱水，然后再透明。 5、 浸蜡 将处理的材料置于1/2石蜡+1/2二甲苯中，56Cs水浴锅40mino再放入石蜡I 90min. H90-120mino透蜡的目的是除去组织中的透明剂，使石蜡渗透到组织内部 达到饱和程度以便包埋。透蜡时间根据组织大小而定。透蜡应在恒温箱中进行，并 保持箱内温度在55-60°C左右，注意温度不要过高，以免组织发脆。一般置于恒温 箱 0. 5ha 注意事项： ⑴尽量保持在较低温度中进行，以石蜡不凝固为度； ⑵透蜡温度要恒定，不可忽高忽低； ⑶操作要迅速，力求在最短的时间内完成石蜡透入过程，以免引起组织变硬、变 脆、收缩等。 6、 包埋 先提升恒温箱的温度至60°C,换纯蜡3次，每次l-2h,用包埋盒至于60C的 烫板上，倒入材料，摆放好材料，吧标签正面向外置于底部，补足石蜡，倒好后 轻轻的置于冷水盆中，注意底面要接触盆中凉水，待石蜡全部凝固后可取出晾 干，也可在凉水盆中放置过夜。 7、 切片 将己固定和修好的石蜡块装在切片机的夹物台上。 将切片刀固定在刀夹上，刀口向上。 摇动推动螺旋，使石蜡与刀口贴近，但不可超过刀口。 调整石蜡块与刀口之间的角度与位置，刀片与石蜡切片约15度左右。 调整厚度调节器到所需的切片厚度，一般为4-10微米 一切调整好后可以开始切片。 切成来的蜡带到20-30cm长时，右手用另一支毛笔轻轻将蜡带挑起，以免卷 曲，并牵引成带，平放在蜡带盒上，靠刀面的一面较光滑，朝下，较皱的一面 朝上。 用单刀面切去蜡块一小段，放在载玻片上加水一滴，置于放大镜或显微镜下观 察切片是否良好。 切片工作结束后，应将切片刀取下用氯仿擦去刀上沾着的石蜡，把切片机擦拭 干净妥善保管。 8、 粘片 将粘贴剂置薄玻片，再取切片浮值粘片剂上，然后置烘片台上，使切片展开烫平， 材料不现皱纹为度。最后将切片依次排好，用滤纸吸去多余水分，同时以记号笔在 玻片上编号，放入温箱中烘干，温度为30-40°C过夜。 9、 脱蜡和染色 纯二甲苯(10—20min) -*纯二甲苯(5—lOmin) -*1/2 二甲苯+1/2 纯酒精-*100%纯 酒精一95%酒精一85酒精一70$酒精一50料酉精一自来水冲洗10s-切片放入苏木精中染色 约10-3