百脉根小gtpase rop6激活蛋白gap的分离和鉴定.pdfVIP

百脉根小GTPa∞ROP6激活蛋白GAP的分离和鉴定 目录 摘要……………………………………………………………………………………．．i Abstract………………………………………………………………………………………………………………．．ii 缩略语表…………………………………………………………………………………。iv 1文献综述………………………………………………………………………………．1 1．1共生固氮的概念与意义……………………………………………………………1 1．2根瘤形成与早期信号转导…………………………………………………………1 1．2．1根瘤的形成……………………………………………………………………．．1 1．2．2共生早期信号转导……………………………………………………………2 1．3植物中的ROP小G蛋白…………………………………………………………6 1．3．1 ROP小G蛋白………………………………………………………………………………………6 1．3．2 ROP的调控机制………………………………………………………………7 1．3．3ROP功能的多样性……………………………………………………………．8 1．4 ROP蛋白的激活蛋白RopGAP…………………………………………………．．13 1．4．1 RopGAP的分类…………………………………………………………………………………。14 1．4．2 RopGAP蛋白的结构和调控机制……………………………………………14 1．4．3GAP的功能分析……………………………………………………………．．16 1．4．4 8 RopGAP的靶物蛋白…………………………………………………………1 8 1．5研究目的及意义……………………………………………………………………1 2材料与方法……………………………………………………………………………20 2．1材料…………………………………………………………………………………………………20 2．1．1质粒和菌株…………………………………………………………………。20 2．1．2植物材料……………………………………………………………………．．21 2．1．3分子生物学和植物转化相关试剂…………………………………………．．21 2．1．4主要的培养基…………………………………………………………………22 2．2方法…………………………………………………………………………………………………………．23 2．2．1酵母双杂交验证蛋白相互作用………………………………………………23 2．2．2体外蛋白Pull．down分析蛋白质之间的相互作用…………………………30 2．2．3表达分析………………………………………………………………………34 华中农业大学2013届硕士研究生学位论文 2．2．4 GTP酶活检测…………………………………………………………………36 2．2．5超表达载体的构建毛根转化…………………………………………………36 3结果与分析……………………………………………………………………………39 3．1蛋白序列分析与三维结构预测…………………………………………………．39 3．1．1 LjGAPs蛋白序列分析………………………………………………………．39 3．1．2 LjRacGAPs蛋白的三维结构预测……………………………………………42 3．2 Rop6与GAPs蛋白酵母体内相互作用…………………………………………．42 3．2．1载体的构建……………………………………………………………………42 3．2．2酵母体内验证相互作用………………………………………………………43 3．3体外w