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2021年生理学实验报告蛙心灌流 2021年生理学实验报告蛙心灌流 PAGE / NUMPAGES 2021年生理学实验报告蛙心灌流 试验名称: 蛙类离体心脏灌流 课程名称: 生理学试验 指导老师: 龙天澄 张碧鱼 陈笑霞 实 验 人: 叶永锋 学 院 : 海洋学院 试验时间: 12月09日 一、 【目要求】 1、 学习斯氏离体蛙心灌流法。 2、 了解心肌生理特征。 3、 观察Na+,K+,Ca2+及肾上腺素(Adr),乙酰胆碱(ACh)等对离体心脏活动影响。 二、 【原理】 将离体蛙心（失去神经支配蛙心）保持在适宜环境中, 在一定时间内仍然能够保持节律性收缩, 心脏正常节律性活动需要一个适宜理化环境, 离体心脏也是如此, 离体心脏脱离了机体神经支配和全身体液原因直接影响, 能够经过改变灌流液一些成份, 观察其对心脏活动作用。心肌细胞自律性、 兴奋性、 传导性及收缩性, 都与钠、 钾及钙等离子相关。血钾浓度过高时（高于7.9mmol/L）, 心脏兴奋性、 自律性、 传导性及收缩性都下降, 表现为收缩力减弱、 心动过缓解传导阻滞, 严重时心脏可停搏于舒张期。血钙浓度升高时, 心脏收缩力增强, 过高可使心室停搏于收缩期。血钙浓度降低, 心肌收缩力减弱。血中钠离子浓度轻微改变, 对心肌影响不显著, 只有发生显著改变时, 才会影响心肌生理特征。肾上腺素可使心率加紧、 传导加紧及心肌收缩力增强, 乙酰胆碱则与肾上腺素作用相反。 【试验仪器】 青蛙、 常见手术器械、 蛙板(或蜡盘)、 蛙心夹、 计算机采集系统、 张力传感器、 支架、 双凹夹、 双针形露丝刺激电极、 滴管、 培养皿(或小烧杯)、 纱布、 棉线、 橡皮泥、 任氏液。蛙心套管(斯氏套管或八木氏套管)、 套管夹、 0．65％NaCl、 5％NaCI、 2％CaCl2、 1％KCl、 1: 5 000肾上腺素、 1: 10 000乙酰肌碱、 300U／mL肝素。 【方法与步骤】 1、 斯氏蛙心插管法 （1）一只青蛙, 双毁髓后背位置于蜡盘中, 按前面方法暴露心脏。仔细识别心脏周围大血管(见右图)。在左主动脉下方穿一线, 于动脉圆锥处结扎(动物个体小时, 结扎位置可靠上些)。再从左右两主动脉下方穿一线, 并打一活结备用。左手提起主动脉上结扎线, 右手用眼科剪在结扎线下方、 沿向心方向将动脉上壁剪一斜口。选择大小适宜蛙心套管, 然后将盛有少许(套管内2～3 cm高度)任氏液(内加入一滴肝素溶液)斯氏蛙心套管, 山开口处插入动脉圆锥(见右图)。当套管尖端抵达动脉圆锥基部时, 应将套管稍稍后退, 使尖端向动脉圆锥背部后下方及心尖方向推进, 经主动脉瓣插入心室腔内(于心室收缩时插入, 但不可插得过深, 以免心室壁堵住套管下口)。此时可见套管中血液冲人套管, 并使液面随心脏搏动而亡下移动, 表明操作成功(不然需退回并重新插入)。用滴管吸去套管中血液, 更换新鲜任氏液。稳定住套管后, 轻轻提起备用线, 将左、 右主动脉连同插入套管用双结扎紧(不得漏液), 再将结线固定在套管小玻璃钩上, 然后剪断结扎线上方血管。轻轻提起套管和心脏, 看清静脉窦位置, 于静脉窦下方剪断有牵连组织, 仅保留静脉窦与心脏联络, 使心脏离体(切勿损伤静脉窦)。用任氏液反复冲洗心室内余血, 使套管内灌流液不再有残留血液。保持套管内液面高度一致(1.5～2 cm), 即可进行试验。 （2）将插好离体心脏套管固定在支架上, 用蛙心夹夹住少许心尖部肌肉 (不可夹得过多, 以免因夹破心室而漏液)。再将蛙心夹上系线绕过一个滑轮与张力传感器相连（如右图）。注意: 勿使灌流液滴到传感器上。调整显示器上心脏收缩曲线幅度适中。 试验观察 (1)统计正常心搏曲线 (2)改用0．65％NaCI溶液灌流, 并作好加药标识, 观察心搏改变。待曲线 氏插管装置出现显著改变时, 立刻吸去套管中灌流液, 同时做好冲洗标识, 并用新鲜任氏液清洗2—3次, 待心搏恢复正常。注意: 换液时切勿碰套管, 以免影响描记曲线基线, 同时保持灌流液面一致(以下同)。 观察可得, NaCI溶液会阻遏心脏搏动。 (3)向套管内加2～6滴5％NaCI(较细套管需少加)溶液, 作好加药记号, 观察心搏曲线频率及振幅改变。当曲线出现显著改变时, 应立刻吸去套管中灌流液, 并做好冲洗标※记, 快速用新鲜任氏液清洗2～3次, 待心搏恢复正常。 (4)同法向套管内加入1～3滴2％CaCI: 溶液, 观察并统计心搏曲线改变。当出现显著改变时, 立刻更换任氏液, 待心搏恢复正常(假如恢复迟缓, 可数次冲洗)。 (5)向套管中加1—2滴1％KCl溶液, 统计心搏曲线改变。当心搏曲线改