人类白细胞抗原基因管理论文.docVIP

人类白细胞抗原基因管理论文 摘要：目的研究人类白细胞抗原(HLA)-DR3、DR7、DR13、DR53等位基因与乙型肝炎病毒(HepatitisBvirus，HBV)宫内感染的关系，探讨HBV宫内感染的遗传易感性，确定HBV宫内感染的易感基因和保护基因。方法采用聚合酶链反应/序列特异性引物(PCR-SSP)技术检测HBsAg阳性孕妇及其新生儿各187例外周静脉血血块中HLA-DR3、DR7、DRl3、DR53等位基因型分布及频率。结果(1)宫内感染组孕妇HLA-DR3基因频率为2414％(7／29)，显著高于非宫内感染组孕妇的633％(10／158)(P=0007)。其余各表型比较，差异无统计学意义(P005)。(2)宫内感染组新生儿HLA-DR3基因频率为1724％(5／29)，显著高于非宫内感染组新生儿的506％(8／158)(P=0033)。其余各表型比较，差异无统计学意义(P005)。(3)母婴HLA-DR3同阳性在宫内感染组与宫内未感染组间比较差异有统计学意义(P=0049)；母婴HLA-DR7、DR13、DR53同阳性在宫内感染组与宫内未感染组间比较，差异无统计学意义(P005)。结论HBsAg阳性孕妇及其胎儿同时或任一携带HLA-DR3，易导致HBV宫内感染；HLA-DR3是HBV宫内感染的易感基因。 【关键词】乙型肝炎病毒；宫内感染；人类白细胞抗原DR等位基因(HLA-DR) 肝炎是一种严重危害人类健康的世界性传染病，我国是乙肝高发区，乙肝病毒的母婴传播不仅造成人群中众多的HBsAg携带者，而且是引起成人慢性肝炎、肝硬化以及肝癌的重要因素。迄今，多数学者认为，人类白细胞抗原DR等位基因(HLA-DR)与乙型肝炎病毒(HBV)感染密切相关，而HLA-DR等位基因与HBV宫内感染的关系争议较多。本文通过研究HLA-DR3、DR7、DR13、DR53与HBV宫内感染的关系，探讨HBV宫内感染的遗传易感性，为防制HBV宫内感染提供理论依据。 1对象与方法 11对象以2003年6月～2004年11月太原市省各市级医院筛检，并在太原市传染病院妇产科进行产前检查及分娩的HBsAg阳性孕妇及其新生儿各187例作为研究对象。并根据新生儿有无宫内感染，分为宫内感染组(29例)和宫内未感染组(158例)，2组在年龄分布、文化程度、职业构成等均衡可比。 12方法 121标本采集及处理收集孕妇肘静脉血及新生儿出生24h内且未注射高效价免疫球蛋白(HBIG，hepatitisBimmuneglobulin)的股静脉血各2ml，4℃冰箱保存，6h内以4000r/min4℃离心15min，分离血清与血块，-20℃保存备检。 122乙肝血清标志物检测采用酶联免疫吸附(ELISA)法，试剂盒（上海科华实业总公司）。 123HBVDNA检测(1)HBVDNA提取：参考文献〔1〕，采用异硫氰酸胍一步法提取血清DNA；(2)HBVDNA的扩增：采用巢式聚合酶链反应(nPCR)。 124HLA-DR等位基因检测(1)人类基因组DNA的提取十二烷基磺酸钠（SDS）蛋自酶K法提取血块基因组DNA。(2)HLA-DR等位基因扩增：参考文献〔2〕的引物设计采用聚合酶链反应／序列特异性引物(PCR-SSP)技术检测孕妇及其新生儿外周静脉血血块中HLA-DR3、DR7、DR13、R53基因型分布及频率。(3)PCR产物的检测：取扩增产物5～10μl，按5：1(V：V)与溴酚兰混匀，加样于15％琼脂糖凝胶(含05μg／ml溴化乙锭)板，在60V／cm电压下泳动50min，紫外灯下观察结果。 125新生儿HBV宫内感染诊断标准新生儿外周血血清HBsAg和/或HBVDNA阳性，即诊断为HBV宫内感染。 13统计分析 资料输入SPSS115软件进行统计分析；计算各指标的阳性率，四格表χ2、Fisher确切概率、OR值及OR95%CI。 2结果 21HBsAg阳性孕妇及其新生儿HLA-DR扩增图谱提取的血块DNA经PCR扩增后呈现明显条带，与标准分子标记物（Marker）条带比较，确定HLA-DR基因型（图1，2，3，4）。中国论文联盟 DR3+：HBsAg阳性孕妇或其新生儿DR3阳性扩增产物，扩增产物片断长度为151bp;DR3-：HBsAg阳性孕妇或其新生儿DR3阴性扩增产物；M：标准分子标记物(Marker) 图1HLA-DR3等位基因的PCR扩增产物电泳结果（略） DR7+：HBsAg阳性孕妇或其新生儿DR7阳性扩增产物，扩增产物片断长度为232bp；DRT-：HBsAg阳性孕妇或其新生儿