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仙鱼汤对小鼠肺癌研究论文 【摘要】【目的】探讨具有健脾清肺、化痰祛瘀作用的中药复方仙鱼汤对小鼠Lewis肺癌生长的抑制作用及其相关的分子机制。【方法】将50只Lewis肺癌荷瘤小鼠分为仙鱼汤高、中、低剂量组(剂量分别为1.747、0.874、0.437g·kg-1·d-1),环磷酰胺(CTX)组(剂量为20mg·kg-1·d-1),荷瘤模型组;计算各组小鼠平均瘤体质量及抑瘤率;制备单细胞悬液,采用流式细胞仪检测各组小鼠Lewis肺癌细胞周期、细胞凋亡率;采用免疫组化法检测各组Lewis肺癌小鼠的bcl2基因的表达。【结果】仙鱼汤高、中、低剂量组及CTX组瘤体质量均低于模型组,肿瘤细胞凋亡率均高于模型组(P 【关键词】仙鱼汤/药理学肺肿瘤/中药疗法细胞凋亡基因表达调控细胞培养 肺癌是严重危害人类健康的恶性肿瘤之一,中医药在肺癌的治疗中发挥着越来越重要的作用。仙鱼汤是治疗肺癌的经验方,具有健脾清肺、化痰祛瘀之功效,多年的临床应用已证实其具有较好的临床疗效[1-2]。本研究通过动物实验,进一步研究了仙鱼汤对小鼠Lewis肺癌生长的抑制作用,并从诱导肿瘤细胞凋亡及调控凋亡相关基因的角度探讨其作用机理。现报道如下。 1材料与方法 1.1动物C57BL/6J小鼠,雌雄各半,体质量18~22g,SPF级,由广州中医药大学实验动物中心提供(合格证号:0020535)。 1.2瘤株小鼠Lewis肺癌细胞株由中国医科大学肿瘤研究所提供,广州中医药大学第一附属医院中医肿瘤研究所长期移植传代。 1.3药物与制备仙鱼汤组成:仙鹤草15g,鱼腥草30g,猫爪草30g,山海螺30g,党参15g,三七片10g,山慈菇10g,浙贝母15g,守宫5g,天冬15g,黄芪30g,炙甘草5g。由广州中医药大学新药研究中心制备,按照传统煎煮法煎煮,低、中、高剂量组药物浓度根据人与动物体表面积与计量换算法计算[3],低剂量组1.092g/mL,中剂量组2.184g/mL,高剂量组4.368g/mL,分别相当于临床等效剂量的1、2、4倍。制备后于4℃冰箱中贮存备用。环磷酰胺(CTX)注射用粉针剂为山西普德药业有限公司产品(批号,200mg/支,临用前用生理盐水溶解,稀释浓度为2mg/mL,根据CTX的半数致死量(LD50)为472mg/kg,注射用量为LD50的1/3~1/5,故小鼠给药剂量设为20mg·kg-1·d-1。 1.4主要试剂与仪器碘化丙啶(PI)染液为晶美生物工程有限公司产品;bcl2兔多克隆抗体、即用型过氧化物酶免疫组织化学染色(SABC)试剂盒(SA1022)均为博士德生物工程有限公司产品;RPMI1640培养基为Gibco公司产品;二甲苯、乙醇,均为市售分析纯;超净工作台(苏净集团安泰公司);冷冻桌面离心机(Eppendorf5810RCentrifuge);解剖显微镜(北京电子光学设备厂);37℃电热恒温水浴箱(上海恒丰仪器仪表有限公司);ALTRA型流式细胞仪(美国Beckmancoulter公司);CSⅣ型烤片机(孝感市电子仪器厂);亿鸣200病理图像分析系统(中国亿鸣)。 1.5Lewis肺癌荷瘤小鼠模型复制于液氮罐中取出Lewis肺癌细胞株1支,置于37℃电热恒温水浴箱内,轻轻摇动令其尽快融化。取出冻存管,用酒精消毒后开启,用吸管吸出细胞悬液,注入离心管并滴加体积分数10%小牛血清RPMI1640培养基,常规离心,制成瘤细胞混悬液,台盼蓝计数约为1×107/mL瘤细胞。消毒小鼠右前腋,取0.2mL(约1×106~2×106个瘤细胞)接种于皮下。传代3次。在无菌条件下剥离Lewis肺癌荷瘤鼠皮下瘤块,选取生长良好的瘤组织,剪碎、称质量,用细胞匀浆器制成匀浆,按体积比1:3加生理盐水制成瘤细胞混悬液,接种于C57BL/6J小鼠右前肢腋窝皮下,每只0.2mL(约1×106~2×106个瘤细胞)。 1.6分组及给药接种24h后随机分为5组:仙鱼汤高剂量组(剂量为1.747g/kg)、仙鱼汤中剂量组(剂量为0.874g/kg)、仙鱼汤低剂量组(剂量为0.437g/kg)、CTX阳性对照组(剂量为20mg/kg)、荷瘤模型组。中药各组均予以0.4mL中药灌胃,CTX组予以0.2mL腹腔注射,荷瘤模型组予以0.4mL生理盐水灌胃,均每日1次,给药14d。 1.7观察指标及检测方法 1.7.1小鼠生活状态观察实验过程中观察小鼠的饮食、毛发、活动、精神状态等情况。 1.7.2抑瘤率末次给药后24h,Lewis荷瘤小鼠颈椎脱臼处死,用眼科剪分离剥取肿瘤,电子天平称质量,计算各组小鼠平均瘤体质量及抑瘤率[4]