基因定点突变技术.ppt

整理课件 整理课件 基因定点突变技术 整理课件 定点突变 定点突变是指通过聚合酶链式反应（PCR）等方法向目的DNA片段（可以是基因组，也可以是质粒）中引入所需变化（通常是表征有利方向的变化），包括碱基的添加、删除、点突变等。定点突变能迅速、高效的提高DNA所表达的目的蛋白的性状及表征，是基因研究工作中一种非常有用的手段。 整理课件 定点突变的目的 基因定点的突变是指按照设计的要求，使基因的特定序列发生插入、删除、置换和重排等变异。 体外定点突变技术是研究蛋白质结构和功能之间关系的有力工具。 蛋白质的结构决定其功能，对某个已知基因的特定碱基进行定点改变，缺失或者插入，可以改变对应的氨基酸序列和蛋白质结构和功能，改造酶的不同活性或者动力学特性。 整理课件 寡核苷酸介导的基因突变指用含有突变碱基的寡聚核苷酸片断作为引物，在聚合酶的作用下启动DNA分子进行复制。 盒式突变是利用一段人工合成的含基因突变序列的寡核苷酸片段，取代野生型基因中的相应序列。 PCR介导的基因突变 定点突破的方法 整理课件 寡核苷酸介导的定点突变 寡聚核苷酸定点诱变技术是由加拿大的生物化学家( michael smith )发明的. 整理课件 寡核苷酸定点突变基本原理 合成一段寡聚脱氧核糖核苷酸作为引物，使其与带有目的基因完全互补。 合成的寡核苷酸引物除短的错配区外，与目的基因完全互补。 然后用DNA聚合酶使寡核苷酸引物延伸，完成单链DNA的复制。 由此产生的双链DNA，一条链为野生型亲代链，另一条为突变型子代链。 将获得的双联分子通过转导入宿主细胞，并筛选出突变体其中基因已被定向修改 整理课件 整理课件 盒式突变 1985年Wells提出的一种基因修饰技术—盒式突变。 盒式突变：用一段人工合成具有突变序列的DNA片段，取代野生型基因中的相应序列。 然而，并非所有变异区附近都能找到合适的限制位点，如果不存在限制位点，就要用寡核苷酸指导的定位诱变引入限制位点。 整理课件 整理课件 PCR介导的定点突变 在最初所建立的PCR方法中就可看出只要引物带有错配碱基便可使PCR产物的末端引入突变。但是诱变部分并不总在DNA的中间部分进行诱变。 目前采用重组PCR进行定位诱变，可以在DNA片段的任意部位产生定位突变。 整理课件 重叠延伸的介导的突变 整理课件 大引物诱导法 整理课件