采样HAHI洗血配制培养液等步骤课件学习资源.pptVIP

采样、HA、HI、洗血、配制培养液等步骤 洗血 1ml 肝素可以抗凝 5.5ml血液 心脏抽取豚鼠血液2ml 在离心管里面加PBS至10ml 离心 3000rpm/ 5min 用塑料吸管弃上清，再加PBS至10ml 离心 1 离心 2 离心 3000rpm/ 5min 弃上清，加PBS至10ml 离心 4000rpm/ 10min 去上清，用塑料吸管将血细胞吸入玻璃瓶 加PBS稀释到0.6%，4%保存备用 标本稀释液 100ml MEM 5ml PS(青链霉素) 病毒稀释液 100ml MEM 200ul TPCK胰酶 1ml PS 细胞培养液 100ml MEM 10ml FBS 1ml PS 种标本 STUC附属第一医院采取流感症状发热儿童咽拭子 咽拭子在振荡器上面振荡，使棉签中的标本充分溶解于液体中 用移液枪取220ul样本稀释液加入到1ml离心管中 吸取275ul标本液加入该离心管中 振荡、在室温作用1-2小时后离心：10000rpm/ 3min 用PBS将细胞培养管洗两遍 吸取420ul离心后的标本液加入细胞培养管 35℃吸附1-2h 加维持液后放入培养箱里，培养5d，每天观察CPE 阳性 阴性 冻存或者继续接种细胞 盲传，同时冻存 HA test 红细胞凝集实验 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 A ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ B