兽医生物制品学第四章生物制品生产基本的创新技术.pptVIP

兽医生物制品学第四章生物制品生产基本的创新技术;一、生物制品毒种的标准 生物学性状明显，历史清楚：形态、生理、生化典型、血清学、来源、代数等清楚。 遗传学纯一稳定：稳定纯一的菌种，才能制造出高质量稳定的疫苗。 免疫抗原、反应抗原好：高质量疫苗的基础。 毒力在适当范围内：灭活疫苗应该是强毒，弱毒疫苗安全，中等毒力的如ND-I系，IBD中等毒力苗。测定毒力要用敏感动物进行。;;;二、强毒种的选育 1、强毒种的用途：灭活疫苗、诊断试剂、抗血清、攻毒试验。 2、强毒种来源：典型传染病分离培养; 保藏中心提供。 3、强毒种分离：;;B、致病力（动物、鸡胚、细胞试验）。 C、抗原性（免疫及反应抗原试验） D、稳定性（传代不变异）;(一)纯粹试验（分离培养、鉴定）。 (二)致病力测定 菌(毒)种的致病力(或称毒力)常用易感实验动物、本动物(原宿主动物)、禽胚或细胞进行测定，用半数致死量(LD50)、半数感染量(ID50)、禽胚半数致死量(ELD50)、胚半数感染量(HD50)、组织细胞半数感染量(TCID50)等来表示。 (三)抗原性测定 反应原性测定，一般采用血清学方法，以抗体滴度或效价表示。 免疫原性测定，通常采用的方法是将菌(毒)株制成疫苗，免疫动物，经1～3 周后用致死剂量的强毒攻击，以保护率表示。抗致死量强毒越多，保护率越高者，免疫原性越好。抗原性的测定，也需设阳性和阴性对照，否则无效。 (四)稳定性测定 一般采用培养基或动物、禽胚、细胞对菌(毒)株进行传代培养，观察其生物学特性，测定其致病力和抗原性，以证明其遗传性状的稳定。;;三、弱毒种的选育 1、用途：弱毒疫苗，诊断试剂，免疫血清。 2、来源：自然界筛选和人工诱变。 3、弱毒筛选途径：;;自然界弱毒筛选： 同源弱毒—新城疫I系 异源弱毒—火鸡疱疹病毒疫苗，它们都是在自然界寻找发现的。 人工诱变筛选： ;;;(3)生物学途径 ① 适应钝感动物(非自然宿主)： 我国的猪瘟兔化弱毒株，是将猪瘟病毒强毒株通过兔体传400 余代后育成的。 ②适应钝感禽胚： 鸭瘟鸡胚化弱毒株，是将鸭瘟病毒强毒株经鸭胚传9 代和鸡胚传23 代后育成的。 羊痘弱毒株---强毒株,鸡胚传代;鸡痘弱毒株—强毒株,鹌鹑传代; ③适应细胞：多采用同源或异源动物组织的原代细胞。我国的马传染性贫血病驴白细胞弱毒株，是将马传染性贫血病驴白细胞强毒株通过驴白细胞传代育成的。 猪丹毒弱毒株(GC42)---强毒株-豚鼠370代,鸡2代.;;4、初选的依据： 生物性状改变—猪丹毒杆菌变长丝状，菌落光滑变粗糙。 病毒蚀斑变异。 温度敏感变异。 药物敏感变异 营养变异 宿主变异;第三节 细菌培养技术;一、细菌生长规律与条件;;二、细菌培养的基本技术;（一）细菌分离培养（目的是稀释病料，得到单个典型菌落）。 1、需氧菌分离培养：分段划线、倾注培养。 2、微需氧培养：鸭疫巴氏杆菌，牛布氏杆菌病，猪传染性胸膜肺炎菌等，用蜡烛缸方法。3、厌氧菌培养：用疱肉基，物理除氧气（加氮气，氢气），化学除氧：焦性没食子酸加烧碱。;;;厌氧罐;;;厌氧培养箱;（二）细菌的规模培养 生物制品是产品，一般要大规模培养，才能满足基层需要。 1、菌种接种量：1-3%，过少生长慢，过度带入有害产物多，影响生长。 2、培养时间：菌苗，对数期和稳定期的细菌好；芽孢疫苗：衰老期细菌；外毒素：需要1周时间培养。在培养过程中，如果有少量污染，可以提前灭活终止培养。;②液体静止培养：一般细菌疫苗多用，用大三角瓶（5000ml）或发酵罐，装入培养基1/2—-2/3量，需氧培养，要5小时摇动一次，增加氧气浓度。培养厌氧细菌，可以装满培养基，上面加少量石蜡油，隔绝空气，下加肝块或肉渣（疱肉基），它们氧化，吸收氧气，达到除氧气目的。液体培养含菌量低，多需要浓缩。;3、培养方法：根据不同制品的性质和要求，选育不同方法。 ①固体表面培养：多用于诊断剂，也有菌苗生产。可随意调节细菌浓度，但操作麻烦，劳动量大。 培养方法有克氏瓶，大平皿，到入菌液，L玻棒刮抹接种，培养后加生理盐水，再用L棒刮洗下细菌混悬液。;;;③液体深层通气培养（发酵罐）：可自动调节温度、氧气、pH、营养、搅拌，注意消泡沫和污染。 ④透析培养：半渗透膜作用，营养可以不断补充，可以提高细菌和毒素含量。 ⑤连续培养：营养不断加入，培养好的细菌不断流出。;KRH-PB-6L 玻璃发酵罐 ;（三）细菌计数技术;②比例法计数（也叫对照法） 如用已知人红细胞为500万/mm3（可以把红细胞0、4%甲醛固定，长期使用），取一环红细胞放在载玻片上，另取一环菌液与红细胞混匀涂片，干燥固