文稿斑马鱼技术平台讲座.pptxVIP

斑马鱼研究技术平台; 斑马鱼简介 斑马鱼(Danio rerio)是属于鲤科(Cyprinidae) 短担尼鱼属(Danio)的一种硬骨鱼。原产于印度、巴基斯坦等地，是一种热带观赏鱼，因其体侧具有像斑马一样纵向的暗蓝与银色相间的条纹而得名。 ;斑马鱼的自然习性;斑马鱼的生活史;斑马鱼的优势;体外产卵和受精，受精卵较大（Ф1mm），胚胎透明，易于观察； 发育快速。至受精后24小时（hpf)，主要的组织器官原基已形成，相当于28天的人胚胎 ；至48-72hpf，胚胎发育完成。 ;根据形态变化，将斑马鱼胚胎发育过程分为7个阶段(28.5℃)： 受精卵期（zygote period） 卵裂期（cleavage period）-0.75hpf 囊胚期（blastula period）-2.25hpf 原肠胚期（gastrula period）-5.25hpf 分节期（segmentation period）-10hpf 咽胚期（pharyngula period）-24hpf 孵化期（hatching period）-48hpf，然后进入幼鱼阶段。;斑马鱼胚胎发育过程;斑马鱼早期胚胎发育; 斑马鱼的基因组信息 斑马鱼有25 对染色体/ 连锁群； 斑马鱼基因组测序工作始于2001.2，主要由英国Sanger 研究所承担； 2010-4-1 -(Zv9) ，已完成组装的序列总长度为1.412 × 109bp Coding genes: 26,163 Non coding genes: 6,041 Pseudogenes: 230 Gene transcripts: 53,778 http://www.sanger.ac.uk/Projects/D_rerio/Zv9_assembly_information.shtml 常用的野生型品系为Tuebingen 系、 AB 系、 WIK 系 相关信息可查阅网站: ;斑马鱼50年代已进入实验室，主要用于毒理学研究;斑马鱼的显著优势之一 ——突变;正向遗传学（Forward genetic approaches）: Chemical mutagenesis via ENU Insertional mutagenesis via retrovirus Gene trap via Tol2 transposon Natural/background mutation screen 2. 反向遗传学（Reverse genetic approaches）: TILLING (Target Induced Local Lesion IN Genes) via ENU mutagenesis and target re-sequencing Enhancer trap/genomic deletion via Tol2 transposon Gene targeting via ZFN (Zinc Finger Nuclease) or TALEN or Cas system 3. 表型模拟（非遗传性变更的表现型） Phenocopy (transient effect): Gene knock down via morpholino antisense oligonucleotides (MO) Chemical genetics via small molecules;突变方法的主要原理 化学突变：化学诱变剂主要有N-甲基-N-亚硝基脲ENU，作用 于减数分裂中的精细胞，产生点突变； 物理突变：γ-射线 等，作用于精子、卵子和早期胚胎，产生 DNA片断缺失、染色体倒位和重排等突变； 病毒突变法：将逆转录病毒注射到斑马鱼胚胎，产生插入突 变，可用于定位克隆 ； 组织特异性突变：利用GFP特异表达组织表型的改变，结 合ENU突变等方法筛选 ;ZFN：锌指核酸酶(ZFN) –zinc finger nuclease 靶向敲除技术，原理：