免疫比浊检验技术原理与进展.ppt

2、抗原抗体的结合——免疫学反应 影响抗原抗体反应的因素 电解质（离子强度）：抗原与抗体发生特异性结合后，虽由亲水胶体变为疏水胶体，若溶液中无电解质参加，仍不出现可见反应。为了促使沉淀物或凝集物的形成，常用0.85％氯化钠或各种缓冲液作为抗原及抗体的稀释液。由于氯化钠在水溶液中解离成Na+和C1－，可分别中和胶体粒子上的电荷，使胶体粒子的电势下降。当电势降至临界电势（12～15mV）以下时，则能促使抗原抗体复合物从溶液中析出，形成可见的沉淀物或凝集物。 酸碱度（pH）：抗原抗体反应必须在合适的pH环境中进行。蛋白质具有两性电离性质，因此每种蛋白质都有固定的等电点。抗原抗体反应一般在pH为6～8进行。PH过高或过低都将影响抗原与抗体的理化性质，例如pH达到或接近抗原的等电点时，即使无相应抗体存在，也会引起颗粒性抗原非特异性的凝集，造成假阳性反应。 温度：在一定范围内，温度升高可加速分子运动，抗原与抗体碰撞机会增多，使反应加速。但若温度高于56℃时，可导致已结合的抗原抗体再解离，甚至变性或破坏；在40℃时，结合速度慢，但结合牢固，更易于观察。常用的抗原抗体反应温度为37℃。每种试验都有其独特的最适反应温度，例如冷凝集素在4左右与红细胞结合最好，20℃以上反而解离。 其它：适当振荡也可促进抗原抗体分子的接触，加速反应。 * PPT课件 3、免疫学检测技术 凝集与沉淀 比浊 电位、微天平 放射性核素标记 酶标记、荧光标记和胶体金标记 化学发光物标记或偶联化学发光反应 非标记免疫检测技术 标记免疫检测技术 * PPT课件 二、免疫沉淀 凝集：细菌、螺旋体和红细胞等颗粒抗原，在适当电解质参与下可直接与相应抗体结合出现凝集，称为凝集反应（agglutination）是最经典的免疫学检测技术。 * PPT课件 二、免疫沉淀 免疫沉淀反应:(precipitation) 可溶性抗原与相应抗体，在适宜条件下发生结合，出现的沉淀现象。 免疫沉淀 液体内沉淀反应 凝胶内沉淀反应 免疫电泳技术 免疫浊度技术 絮状沉淀试验 环状沉淀试验 单向扩散试验 双向扩散试验 试管法 平板法 免疫电泳 对流免疫电泳 火箭免疫电泳 免疫固定电泳 透射免疫比浊turbidimetermeasure 散射免疫比浊nephelomitermeasure * PPT课件 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 各管抗原倍比稀释 加入抗血清 各管抗体量不变 振摇 混匀、37℃孵育 沉淀量不同 试管内絮状沉淀试验 轻摇 絮 状 沉 示 意 图 淀 Ag Ab Ag * PPT课件 Ab Ag 凝胶内沉淀——试管法 单向琼脂扩散试验 * PPT课件 凝胶内沉淀试验——平板法 标准品抗原浓度测定 不同病人抗原浓度测定 原理 将一定量的抗体混入琼脂凝胶中，使待测抗原在凝胶中自由扩散，与相应抗体结合形成沉淀环，沉淀环大小与抗原浓度呈正相关。 * PPT课件 凝胶内沉淀——双向琼脂扩散原理示意图 Ab Ag 模拟图 染色琼脂图 1.抗原抗体双向自由扩散 2.24小时出结果 3.呈现沉淀线或弧 * PPT课件 三、免疫比浊技术原理 当可溶性抗原与相应抗体特异结合，二者比例合适时，在特殊的缓冲液中它们快速形成一定大小的抗原抗体复合物，使反应液体出现浊度。利用现代光学测量仪器对浊度进行测定从而检测抗原含量。 检测器 光源 透镜 滤光片 平光线 散 射 透射光 * PPT课件 λ 光波 比浊测定法原理示意图 d 当复合物大于入射光波的1/20时，形成不对称前向散射， 在90o以前的角度测量散射光皆取得最佳效果，散射光 的量代表复合物的量 当复合物小于入射波长时呈全透射， 透射与散射相当 * PPT课件 三、免疫比浊技术原理 免疫比浊技术分类： 按光路 透射免疫比浊 散射免疫比浊 按测定时间 终点比浊 速率比浊 按增敏剂 无增敏 PEG增敏 胶乳增敏 * PPT课件 透射比浊法和散射比浊法光路 检测器A 检测器B IC I0 Iθ I θ 透射比浊法 散射比浊法 透射免疫比浊法是在180°角， 即在直射角度上测定光透射强度。 散射比浊法在光路的5°～96°角的方向上测量散射光强度。 * PPT课件 单色器 透 射 比 浊 计 散射 比浊计 散射比浊和透射比浊的区别示意图 θ 透射光 散射光 散射光 * PPT课件 PPT课件 免疫比浊分析技术原理与进展 * PPT课件 一、免疫学基本原理 二、免疫沉淀 三、免疫比浊技术原理 免疫比浊检验技术原理与进展 * PPT课件 精品资料 你怎么称呼老师？ 如果老师最后没有总结一节课的重点的难点，你是否会认为老师的教学方法需要改进？ 你所经历的课堂，是讲座式还