免疫学检测方法.pptVIP

免疫学技术是利用抗原抗体特异性反应的原理建立的各种检测与分析技术，以及建立这些技术的各种制备方法。;*;精品资料; 你怎么称呼老师？ 如果老师最后没有总结一节课的重点的难点，你是否会认为老师的教学方法需要改进？ 你所经历的课堂，是讲座式还是讨论式？ 教师的教鞭 “不怕太阳晒，也不怕那风雨狂，只怕先生骂我笨，没有学问无颜见爹娘 ……” “太阳当空照，花儿对我笑，小鸟说早早早……”;*;检测技术种类;*;细菌凝集反应被广泛应用于细菌学的诊断。在凝集反应中，将参与反应的抗原称为凝集原，抗体称为凝集素。凝集法测定哈维氏弧菌抗体的效价 ;*;*;*;沉淀凝集反应;*;*;*;*;双向免疫扩散沉淀线示意图;琼扩反应;*;*;中和实验;荧光免疫技术;1、原理;荧光色素;1、荧光抗体染色方法 直接法 间接法2、荧光抗体技术的应用 在细菌学诊断中的应用 在病毒感染诊断中的应用 其它方面的应用;间接荧光抗体法（IFAT）操作步骤如下：（1）单层血细胞滴片，室温晾干，放入丙酮中固定10min。室温晾干。（2）以小白鼠抗血清（或杂交瘤细胞上清液）为第一抗体，加在血细胞抗原上。37℃湿盒中孵育45min。（3）0.01M PBS洗三次，每次5min。（4）加第二抗体IgG-FITC ，37℃湿盒中孵育45min。（5）0.01M PBS洗三次，每次5min。（6）甘油封片，荧光镜下观察，拍照。;间接免疫荧光法检测对虾白斑症病毒病;间接免疫荧光法检测淋巴囊肿病毒;*;*;*;直接ELISA;间接ELISA;间接酶联免疫吸附试验 操作步骤如下： （1）分别以不同单抗为第一抗体，加在血细胞抗原上。37℃湿盒中孵育60min。 （2）0.01M PBS洗三次，每次5min。 （3）加AP-IgG 为第二抗体，37℃湿盒中孵育45min。 （4）0.01M PBS洗三次，每次5min。 （5）加NBT/BCIP底物缓冲液发色10min， （6）出现颜色加终止液终止反应。 （7）用酶标分析仪在405nm,处测定各孔的吸光度，计算P／N（样品光吸收值与阴性对照的值），判定ELISA反应结果。大于2.1时可判断为阳性。以最大显色至阳性的显色孔50%反应孔的抗体稀释倍数为抗体效价。 ;*;图 DOT BLOT方法筛选结果图。;免疫组织化学方法定扇贝血细胞分布;细胞免疫化学法检测病毒感染;四、Western blot ;West Blot ;图：淋巴囊肿病毒与抗血清的Western blotting结果;*;免疫电镜技术;图 胶体金标记免疫电镜结果[(A) (D) bar = 200 nm; (B) (C) bar = 100 nm];胶体金免疫技术; 斑点免疫金渗滤法（DIGFA）的应用 与研究进展 是20世纪八十年代发展起来的一种免疫学检 测方法，具有简便、快速、准确等优点。目前在 医学检验中主要应用于检测 HBsAg、HCG 和HIV等。; 斑点免疫金渗滤法原理： NCM为固相载体-----通过渗滤----抗原与抗体在膜上快速反应-----标记的胶体金堆积显色。 ; 临床应用： 间接法测抗体： NCM 抗原----样品抗体----金标抗抗体显色 夹心法测抗原： NCM多抗----样品抗原----金标单抗显色。; 直接法检测抗原 NCM病毒---金标单抗显色 DIGFA步骤简化、时间缩短。 ; DIGFA检测操作程序 2μl检测样品-----NCM----直径2mm点-----晾干； 100μl封闭液，渗入； 100μl的金标抗体，渗入； 100μl 的0.01M PBS-T（含0.05%Tween-20），渗入； 检测结果：红色斑点的为阳性，无红色斑点的为阴性。 阳性代表检测样品中有病毒，阴性则无。 ; DIGFA检测结果, 红色斑点的为病毒阳性,无红色斑点的为病毒阴性。 The result of DIGFA, red dot shows there is WSSV, otherwise, there is no WSSV. ; 免疫金标层析法的应用与研究进展 ;检测试纸的原理是