医学免疫学：实验三 免疫学检测技术.pptxVIP

实验三 免疫学检测技术 免疫标记技术 ELISA---双抗夹心法 (1份/组) 细胞免疫功能检测 E玫瑰花环实验 示教 淋巴母细胞转化实验 示教 一、ELISA---双抗体夹心法 血清总IgE是针对各种抗原的特异性IgE的综合，正常人血清IgE含量极低，故需要采用高度灵敏的方法进行检测。 本实验采用双抗体夹心ELISA法。 双抗体夹心法 加抗原 加酶标抗体 加底物 实验材料 羊抗人IgE抗体（已包被到反应孔） 酶标羊抗人IgE抗体 底物 显色剂 实验步骤 在反应孔中加待测血清1滴，阴\阳性对照各1滴，室温放置20分钟，倒掉反应液，用洗液洗涤并甩掉，在吸水纸上拍干。 每孔加酶标羊抗人IgE抗体1滴，室温放置10分钟，倒掉反应液。 用洗液反复洗涤5遍，在吸水纸上拍干。 加底物1滴 加显色液1滴，观察结果。 二、E玫瑰花环形成实验 实验原理： T细胞表面标志CD2，即绵羊红细胞受体 绵羊红细胞表面CD58可与CD2结合 可用于T细胞的计数与分离 三、T淋巴细胞转化实验 T细胞受到特异性抗原或非特异性丝裂原刺激时，可发生转化。 特异性抗原 非特异性丝裂原：PHA、ConA等。 正常人淋巴细胞受到PHA刺激后，其转化率为60-80%。 转化细胞形态特征 细胞体积：增大 细胞核 大小：增大 染色质：疏松 核仁：清晰 有丝分裂：+/- 细胞浆 着色 空泡或伪足