第41章基因工程及蛋白质工程.ppt

第41章基因工程及蛋白质工程;第一节 概 述;1972年美国斯坦福大学的Berg和他的同事将λ噬菌体基因和大肠杆菌乳糖操纵子插入猴病毒SV40 DNA中，首次构建出DNA的重组体。 1973年，Cohen和Boyer获得了抗四环素和新霉素的重组菌落，标志着基因工程的诞生。; 技术上的三大发现 限制性内切酶和DNA连接酶的发现 （标志着DNA重组时代的开始）。 载体的使用。 逆转录酶的发现。; 第二节 工具酶 DNA分子的剪切、重组、合成及修饰涉及一系列酶促反应，催化这些反应的酶是基因操作的基本工具，故又称为工具酶。工具酶在基因克隆中占有非常重要的地位，只有了解其作用机制后，才能加以灵活应用。;;一、限制性核酸内切酶;（一)限制酶的命名和分类;2. 限制性核酸内切酶的分类 ;（二) II型限制酶的识别和切割位点 II 型限制性核酸内切酶的基本特性: 识别双链DNA分子中4-8对碱基的特定序列,大部分酶的切割位点在识别序列内部或两侧,识别切割序列呈典型的旋转对称型回文结构(palindrome).;EcoRI等产生的5‘粘性末端(Sticky end);PstI 等产生的3‘粘性末端;; 现巳提纯供商品用的限制酶有400余种，其中常用者列举于表下表; 使用限制酶时应注意提供适宜的反应条件，如DNA底物