基因的化学合成.pptVIP

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2021-08-29 发布于湖北
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基因的化学合成.ppt

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* * 合成的目的：得到所需要的目的基因基因化学合成定义：基因的化学合成也就是以四种核苷酸为原料合成DNA或RNA序列。大致大概过程：用自动合成仪合成寡核苷酸链，再将其连接起来形成基因。自动合成仪亚磷酰胺寡核苷酸链所需目的基因组装蛋白质产物 OH HO 合成组装 ATTGACTCAGCTAGCGTACCTTGAT TGAGTCGATCGCATGGAACTAGGCT 亚磷酰胺 HO 磷酸化完整的目的基因剪切，导入，表达产物基因的组装：就是将寡核苷酸片段连接成完整的基因的方法，这种方法就叫基因的组装。现在常用的方法有两种： ★ 全片段酶促连接法 ★ 酶促填充法 ★ 全片段酶促连接法将人工合成的全部寡核苷酸片段放在适宜的条件下进行复性，得到带有黏性末端的双链寡核苷酸片段，再用T4DNA连接酶将其连接成完整的基因片段。 ★ 全片段酶促连接法 5′ 3′ 复性 DNA连接酶复性 DNA连接酶复性 DNA连接酶复性 T4连接酶合成完整的目的基因 ★ 酶促填充法合成部分寡核苷酸链片段，在适当的条件下进行复性得到模板——引物复合体，然后在大肠杆菌DNA聚合酶I大片段作用下以四种核苷酸为原料去填充片段间的单链区域，于是就形成了我们要的基因。磷酸化复性 DNA连接酶大肠杆菌DNA 聚合酶I大片段+dNTPs 完整的基因 5’ 3’ 限制性核酸内切酶互补后的双链