流式细胞仪常用的几种检测方法.docVIP

可修改 欢迎下载 精品 Word 可修改 欢迎下载 精品 Word 可修改 欢迎下载 精品 Word 流式细胞仪常用的几种检测方法（转载） 一、测定用乙醇固定的DNA的含量1、培养细胞的DNA含量的测定制备单细胞悬液于200μl的PBS缓冲液中；加入2ml预冷的70%乙醇，4℃保存；附:细胞固定的一般步骤1)? ?? ???取单细胞悬液1～2×106个细胞于PBS（PH=7.2）缓冲液中；2)? ?? ???300g离心5分钟，弃上清，反复两次；3)? ?? ???重悬细胞于0.5ml PBS缓冲液中；4)? ?? ???将细胞悬液放置于2～3ml冷70%乙醇中，混匀，保存于4℃，至少30分钟。在4℃条件下可保存2~3周。注意：2? ?? ? 根据实验的要求，固定剂也可选用1～3%多聚甲醛；2? ?? ? 将乙醇作为固定剂时，乙醇应预冷至0～4℃；2? ?? ? 细胞在固定时，固定剂应缓慢滴入细胞悬液中，使固定剂的浓度缓慢增加，并不断震摇，以免细胞成团（特别是用乙醇固定时）。2? ?? ? 300g离心5分钟，去上清，再重悬于400μl PBS中；2? ?? ? 显微镜下观察，若有明显的黏附，须再用筛网过滤；2? ?? ? 加入PI（含Rnase），避光孵育30分钟；2? ?? ? 上机检测。2、新鲜组织的DNA含量