蛋白质结构与功能关系精品课件.pptVIP

生物化学;;1.4 蛋白质结构与功能的关系;;2. 蛋白质一级结构决定其高级结构，因此最终决定了蛋白质的功能。 ;猪胰岛素原激活成形成胰岛素示意图;;3.功能相似的蛋白质往往能显似它们在进化上的亲缘关系： 比较不同来源的细胞色素C发现，与功能密切相关的氨基酸残基是高度保守的，这说明不同种属具有同一功能的蛋白质，在进化上来自相同的祖先，但存在种属差异。 不同种属间的同源蛋白质一级结构上相对应的氨基酸差别 越大，其亲缘关系愈远，反之，其亲缘关系愈近。 ;14;2021/8/23;血红蛋白的亚基与肌红蛋白一级结构中的保守氨基酸残基;⒋ 许多疾病都是由于相关蛋白质结构异常引起的;2021/8/23;2021/8/23;正常红细胞与镰刀形红细胞的扫描电镜图;2021/8/23;???? 所以，蛋白质一定的结构执行一定的功能。功能不同的蛋白质总是有着不同的序列；比较种属来源不同而功能相同的蛋白质的一级结构，可能有某些差异，但与功能相关的结构也总是相同。若一级结构变化，蛋白质的功能可能发生很大的变化。 ;二、蛋白质的空间结构与功能的关系 ;肌红蛋白的结构;2021/8/23;肌红蛋白的亚基铁卟啉;2021/8/23;肌红蛋白的氧合曲线;2021/8/23;? Hb由4条肽链组成：2α、2β，功能是运载O2 。在去氧Hb亚基中有下列几对离子键：;2021/8/23;?? ?由于血红蛋白亚基之间存在大量离子键，使其构象呈紧张态，对氧的亲和力很低，第一个亚基与O2结合时，离子键的破坏较难，所需要的能量较多。当血红蛋白的一个亚基结合氧之后引起它的构象从紧张态变成松弛态，其它的离子键也依次破坏，此时破坏离子键所需要的能量也少，构象的变化导致血红蛋白对氧的亲和力大大增强，因此第四个亚基结合氧的能力比第一个大几百倍。 ;;2021/8/23;2021/8/23;2021/8/23;上述Hb与O2结合后，Hb的构象发生变化，这类变化称为变构效应，即通过构象变化影响蛋白质的功能。像血红蛋白这种具有变构效应的蛋白质称为变构蛋白（allosteric protein）。血红蛋白的这种变构效应能更有效地行使其运氧的生物学功能。;血红蛋白的变构效应使其有利于氧的运输; 总之，各种蛋白质都有特定的空间构象，而特定的空间构象又与它们特定的生物学功能相适应，蛋白质的结构与功能是高度统一的。;1.5 蛋白质的理化性质及分离纯化;2、蛋白质的高分子性质;透析;2021/8/23;3、蛋白质的沉淀作用;2）.生物碱试剂沉淀法（条件：pH稍小于pI） 生物碱是植物组织中具有显著生理作用的一类含氮的碱性物质。能够沉淀生物碱的试剂称为生物碱试剂。生物碱试剂一般为弱酸性物质，如单宁酸、苦味酸、三氯乙酸等。 生物碱试剂沉淀蛋白质的机理：在酸性条件下，蛋白质带正电，可以与生物碱试剂的酸根离子结合而产生沉淀。 “柿石症”的产生就是由于空腹吃了大量的柿子，柿子中含有大量的单宁酸，使肠胃中的蛋白质凝固变性而成为不能被消化的“柿石”。;4）.有机溶剂沉淀法：在蛋白质溶液中，加入能与水互溶的有机溶剂如乙醇、丙酮等，蛋白质产生沉淀。 有机溶剂沉淀法的机理：破坏蛋白质的水化膜。 有机溶液沉淀蛋白质通常在低温条件下进行，否则有机溶剂与水互溶产生的溶解热会使蛋白质产生变性。;?4、蛋白质的变性作用;4).蛋白质变性后的表现： A 生物学活性消失B 理化性质改变：溶解度下降，粘度增加，紫外吸收增加，侧链反应增强，对酶的作用敏感，易被水解。 ;5、蛋白质的颜色反应;双缩脲反应;?6、蛋白质的紫外吸收特征;1.6 蛋白质的分离纯化与测定;1.原料的选择：要求含待分离的蛋白质丰富，廉价，易得，容易收集，新鲜无腐败。 2.原料的预处理：如果待分离蛋白质为胞外蛋白质，材料破碎后，用适当的溶剂直接抽提；若待分离蛋白质为胞内蛋白质，则需要破碎细胞膜，再用适当的溶剂抽提。 3.从抽提液中沉淀蛋白质：常用盐析法、低温乙醇沉淀法、等电点沉淀法。;;（2） 粗分离蛋白质混合提取液∣∣盐析法、等电点沉淀、有机溶剂↓所要蛋白质与其他杂蛋白质分开特点：简便、处理量大、既能除去大量杂，又能收缩蛋白质溶液　（3）纯化 ;1）凝胶过滤 （凝胶过滤层析，分子排阻层析） （分子筛层析，凝胶渗透层析）根据分子分离蛋白质混合物①凝胶过滤的介质凝胶珠--多孔的网状结构交联度or孔度（网孔大小）－－决定凝胶的分级范围，即能被该凝胶分离开来的蛋白质混合度的分子量范围排阻极限－－表示分级范围的上限，不能扩散进入凝胶珠微孔的最小分子量的分子量凝胶粒度--筛眼（目）数，珠直径表示－－→