[分子生物学]第六节目的基因的分离.pptxVIP

第六节目的基因的获得;? 基因工程的主要目的是通过优良性状相 关基因的重组，获得具有高度应用价值的新物 质（品系），为此必须从现有生物群体中，根 据需要分离出可用于克隆的相关基因，这样的 基因通常称之为旦鱼基因，目的基因主要是结 构基因。 ?目的基因可以是完整的基因（包括转录启动子、 基因编码区和转录终止子）,也可以是基因的 部分片断。;?作为一个能转录和翻译的结构基因必须包括;口原核生物结构基因的组成;口真核生物结构基因的组成;口其他类型基因组的基因组成;LPCR技术获取目的基;.反转录PCR;?根据目的基因的编码区序列两侧设计正反引物，一个是逆 I转录引物作为反义引物，另一个是基因特异正向引物，两 I个引物必须保证能扩增出基因的编码区序列。;?已知目的基因蛋白产物的N端部分氨基酸序列信息 时，就可以以此设计特异引物，RNA从中通过RT. PCR获得目的基因。首先Oligo(dT)g反转录第一链, 接着以N端部分氨基酸序列反推的 为正向 引物，01igo(dT)1218为反向引物进行扩增。;o;首先提取基因组DNA,用一种在已 知DNA区没有识别位点的限制酶切 割，产生含上、下游未知区域DNA 片断，然后通过t4dna连接酶处理 形成首尾相连的双链环状DNAo根 据已知区域设计两套巢式引物即外 测引物SI、A1和内侧引物S2、A2 进行巢式PCR,获得特异PCR产物。