4电离辐射的生物效应.pptx

电离辐射的生物效应;概述;电离辐射对机体的作用首先是辐射能量向细胞分子的传递，包括水分子和生物大分子。进而影响细胞、组织、器官乃至整个机体。 生物大分子主要涉及DNA、RNA和蛋白质，其中DNA的辐射效应尤为重要。;一、小白鼠受γ-射线后LD50/15的测定;实验原理; 一般以不同剂量的射线照射同种系、同性别、同年龄的小白鼠，使之产生急性放射损伤，以15天内小鼠的死亡率作为生物效应指标，得到剂量－死亡率曲线。;动物;照射方法与步骤 ;3、在每组动物笼壁上标明照射剂量，60Coγ射线的照射剂量分别为1.24、1.56、1.96、2.46、3.08、3.86、4.84、6.06、7.60、9.52Gy。各组在照射时间一半时，调节动物笼保证全身均匀照射。照后，常规饲养。 4、照射后按规定时间记录。每天上午、下午、晚上各观察一次，记录小白鼠的死亡数，共观察15天。;实验结果;组别;2、利用目测概率单位法和寇氏法求出小白鼠LD50/15，并绘制出小白鼠死亡率曲线。;目测概率单位法;实习报告;分析讨论思考题;二、电离辐射引起DNA链断裂的测定; 许多荧光燃料可用来标记DNA，这些染料有：Hoechst、DAPI(4‘6-diamidino-2-phenylindole，4’6-二脒基－2-苯基吲哚)、溴化乙啶、吖啶橙等。 DAPI是DNA特异荧光染料，DAPI结合双链DNA的小沟，尤其是A-T碱基簇部分，为非嵌入方式，结合后，荧光增强约20倍。DAPI与DNA结合后以紫外激发，发射出明亮的蓝色荧光，用荧光分光光度仪测定出荧光强度。;关键技术;4、 取各上清时,不应贪多,以防非核酸类成分干扰 5、提取DNA过程中所用到的试剂和器材要通过高压烤干等办法进行无核酸酶化处理。 6、所有试剂均用高压灭菌双蒸水配制。;试剂和主要仪器;3、荧光缓冲液 10mmol／L Tris，pH7.4 10mmol／L EDTA，pH7.5 100mmol／L NaCl 4、DAPI贮存液 1mg/L DAPI 注*：DAPI可能是致癌剂。吸入、吞食或经皮肤吸收均有害。配制试剂时应戴手套，勿吸入粉尘。;5、0.01mol/L PBS 6、白细胞稀释液 ：2%冰醋酸 二、主要仪器 荧光分光光度仪 ;实验步骤 ;2、制备胸腺细胞单细胞悬液 ;3、DNA的提取与分离;;4、DNA荧光检测 ;5、DNA裂解率的计算;分析讨论思考题 ;三、小鼠骨髓造血干细胞剂量－存活曲线的测定 ; 通过体内或体外测量技术可测定不同剂量照射后细胞的集落数，计算出各剂量点细胞的存活分数(Surviving fraction)，并绘制出该细胞的剂量存活曲线，求出相应的参数(如D37值或D0值等)，以比较细胞的放射敏感性。 ; 本实验采用细胞存活的体内测量技术，测定骨髓多能造血干细胞的剂量存活曲线。其原理是：将受不同剂量照射小鼠(称之为供体)的骨髓细胞移植到受致死剂量照射的同系小鼠(称之为受体)体内。供体造血干细胞可在受体脾脏增殖形成集落，称之为脾集落或脾结节。因此时受致死剂量照射的受体小鼠体内已无内源性造血干细胞存在，故移植后在受体小鼠脾脏形成的脾结节则全部来自供体。; 通过实验可测定出不同剂量照射后的脾结节数，计算出存活分数，并绘制出骨髓多能造血干细胞的剂量存活曲线。;主要试剂和器材 ;实验步骤;2） 制备骨髓单细胞悬液 剪去股骨上端，用装有6号针头的注射器（事先用1640培养液冲洗）由骰骨下端刺入，将骨髓腔内的全部骨髓细胞冲入盛有10ml培养液的广口瓶中(反复冲3次)。然后，换4号针头吹打细胞，制备单细胞悬液。按白细胞计数法计数有核细胞数，调细胞浓度为5×105个／ml。置广口瓶于冰上，保存细胞备用。 ;2、受体小鼠的准备及骨髓细胞输注;3、脾结节计数;实验结果 ;;分析讨论思考题