慢病毒载体及慢病毒介导的RNA干扰_冯小明.pdfVIP

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2021-09-07 发布于广东
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慢病毒载体及慢病毒介导的RNA干扰_冯小明.pdf

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DOI:10．13881／j．cki．hljxmsy．2009．03．004 ＨｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇＡｎｉｍａｌＳｃｉｅｎｃｅ　 24 　　　ａｎｄＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ　　　№ 22009 冯小明张　杰刘永生陈豪泰马丽娜孙德惠（中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室肃兰州 730046）中图分类号：Ｓ852．65 文献标识码：Ａ文章编号：1004-7034（2009）03－0024－02 关键词：慢病毒；载体；ＲＮＡ干扰摘　要：慢病毒载体是高效基因转导工具能将外源基因序列稳定导入分裂期细胞和非分裂期细胞。将慢病毒载体与ＲＮＡ干扰结合能在哺乳动物各类细胞中特异性抑制同源基因表达它将是基因功能研究和基因治疗有力手段。应用慢病毒载体进行转基因动物制备转基因效率将得到显著提高。慢病毒介导ＲＮＡ干扰具有高效、稳定、特异性强特点它能在哺乳动物各类细胞、多种疾病离体细胞中实现稳定ＲＮＡ干扰。该技术被广泛用于基因功能研究在疾病基因治疗上也具有良好前景。　　慢病毒（ＬｅｎｔｉｖｉｒｕｓＬＶ）是逆转录病毒科的病毒 10ｋｂ因此适用于多基因表达系统。慢病毒在整合成员。慢病毒感染细胞后在自身逆转录酶的作用下时并不倾向于转录的起始位点而是在基因的整个转以病毒基因组ＲＮＡ为模板逆转录形成双链ＤＮＡ中录区域都可以整合整合的慢病毒对启动子的激活机间体然后整合到宿主细胞染色体ＤＮＡ上作为细胞会会更低。因此与其他致癌逆转录病毒载体相比基因组的一部分随着细胞基因组的复制和细胞分裂慢病毒载体更不易引起插入突变。传递下去并且在宿主ＲＮＡ聚合酶的作用下转录形 1．2　慢病毒载体的构建及产量成新的子代病毒。慢病毒载体较逆转录病毒载体有慢病毒基因组结构复杂除了含有ｇａｇ、ｐｏｌ、ｅｎｖ更广的宿主范围慢病毒能够有效感染非周期性和有 3个逆转录病毒共同具备的结构基因及 5端′和 3端′ 丝分裂后的细胞。慢病毒作为ｓｉＲＮＡ的携带者不ＬＴＲ结构外还包括 4个辅助基因ｖｉｆ、ｖｐｒ、ｎｅｆ、ｖｐｕ和但具备特异的使基因表达沉默的能力而且还能充分 2个调节基因ｔａｔ和ｒｅｖ。质粒一携带了ｇａｇ／ｐｏｌ编码发挥慢病毒载体自身所具备的优势为基因功能的研序列及ＲＲＥ；质粒二包含了编码ｒｅｖ的序列；质粒三究提供强而有力的工具。是载体质粒；质粒四表达ｅｎｖ。4个质粒系统包装的 1　慢病毒载体的特点、构及产量病毒大部分转录失活即使在病毒基因组发生重组的慢病毒载体是以人类免疫缺陷Ⅰ型病毒（ＨＩＶ－情况下病毒基因组的复制也会受到限制从而其安 1）为基础发展起来的基因治疗载体对分裂期细胞全性显著提高并且对细胞转导效率无影响。慢病毒和非分裂期细胞均具有感染能力。载体的构建要尽可能除去反式功能基因序列并以外 1．1　慢病毒载体的特点源基因来代之同时保留或部分保留病毒本身的ＬＴＲ慢病毒经过改造成为慢病毒载体改造的目的主及病毒的包装信号 ψ。包装细胞可以为缺陷型病毒要是提高生物安全性及增加外源基因的表达效率。提供所需要的各种蛋白带有目的基因的重组慢病毒各种慢病毒载体的结构和作用机制基本相同。载体转染包装细胞虽然自身不能表达所必需的病毒慢病毒载体的最大特点是在感染分裂期细胞的蛋白