蛋白质的性质及分离分析技术.pptxVIP

会计学;蛋白质的理化性质;一、蛋白质的两性解离与等电点; 等电点时特点： （1）净电荷为零 （2）一定离子强度的缓冲液：等离子点特征常数 （3）多数蛋白质在水中等电点偏酸 碱性AA/酸性AA 等电点 胃蛋白酶 0.2 1.0 血红蛋白 1.7 6.7 细胞色素C 2.9 10.7 菊糖酶 0.34 8.2 （4）导电性、溶解度、黏度及渗透压都最小。 等电沉淀和蛋白电泳： 迁移率与净电荷量、分子大小、分子形状等有关;带电粒子在电场中移动的现象称为电泳（electrophoresis） 。;蛋白质分子在一定pH的溶液中可带净的负电荷或正电荷，故可在电场中发生移动。 不同蛋白质分子所带电荷量不同，且分子大小也不同，故在电场中的移动速度也不同，据此可互相分离。;二、蛋白质的胶体性质;二、蛋白质的胶体性质;蛋白质颗粒的表面电荷和水化膜;3.蛋白质凝胶 凝胶作用： 蛋白质颗粒周围的水膜是不均匀,使它们以一定的部位结合形成长链。这些长链又彼此结合成为复杂的网状结构的凝胶体。;3.蛋白质凝胶 凝胶具有胀润作用： 分类：（1）可逆性凝胶 （2）不可逆性凝胶 部分破坏水化膜、适当加热和远离等电点 4.蛋白质胶体性质的应用 渗析（透析） 超滤;三、蛋白质的变性、复性与凝固作用;1、变性理论 蛋白质的变性就是天然蛋白质分子中肽链的高度规则的紧密排列方式因氢键及其他次级键的破坏而变成不规则的松散排列方式。 2、引起蛋白质变性的因素： ① 物理因素： 高温、高压、紫外线、电离辐射、超声波、机械搅拌 ② 化学因素： 强酸、强碱、有机溶剂、尿素、胍、重金属盐等。;① 物理性质： 旋光性改变，溶解度下降，结晶能力下降，沉降率升高，粘度升高，光吸收度增加等； ② 化学性质： 官能团反应性增加，呈色反应增强，易被蛋白酶水解。 ③ 生物学性质： 原有生物学活性丧失，抗原性改变。 ;蛋白质变性的可逆性－复性： 某些蛋白质变性后可以在一定的条件下重新形成原来的空间结构，并恢复原来部分理化特性和生物学活性，这个过???称为蛋白质的复性（renaturation）。;核糖核酸酶的变性与复性;蛋白质变性的可逆性与复性;蛋白质的热变性与凝固作用;蛋白质的热变性与凝固作用;蛋白质变性的应用;外加一些因素去除蛋白质胶体的稳定因素后，使蛋白质分子相互聚集而从溶液中析出的现象称为沉淀（precipitation）。;2.沉淀种类：可逆与不可逆;2.沉淀种类：可逆与不可逆;（1）盐析—中性盐沉淀;（1）盐析—中性盐沉淀;常用的中性盐：硫酸铵、氯化钠、硫酸钠等。 盐析时，pH在蛋白质的等电点处效果最好。 盐析沉淀蛋白质通常不会引起蛋白质的变性。 优点 盐析应用举例; 分段盐析： 半饱和硫酸铵溶液可沉淀分子量较大的血浆球蛋白,而饱和硫酸铵溶液可沉淀分子量较小的血浆清蛋白。因此,使用不同浓度的硫酸铵溶液就可将分子量不同的蛋白质进行初步分离。;凡能与水以任意比例混合的有机溶剂，如乙醇、甲醇、丙酮等，均可用于沉淀蛋白质。 沉淀原理： ① 脱水作用——破坏水化膜； ② 使水的介电常数降低，蛋白质溶解度降低。; 处理条件： ① 低温操作； ② 沉淀完全后尽快分离；;（1）重金属盐沉淀法 （2）生物碱试剂沉淀法（除蛋白作用） （3）热凝固沉淀法 （4）抗体对抗原蛋白质的沉淀;沉降的概念 沉降速率：v=dx/dt 沉降常数与单位 应用： 沉降速度法测定分子量的原理； 梯度离心分离蛋白质（氯化铯）；;六、蛋白质的颜色反应;六、蛋白质的颜色反应;六、蛋白质的颜色反应;六、蛋白质的颜色反应;六、蛋白质的颜色反应;六、蛋白质的颜色反应;六、蛋白质的颜色反应;七、蛋白质的紫外吸收性质;蛋白质的分离纯化;一、分离纯化的基本方法;2、层析;主要的层析技术有离子交换层析，凝胶层析，吸附层析及亲和层析等。;离子交换层析分离蛋白质;凝胶过滤分离蛋白质;3、超速离心：;二、蛋白质含量的测定;带电粒子在电场中移动的现象称为电泳（electrophoresis） 。;蛋白质分子在一定pH的溶液中可带净的负电荷或正电荷，故可在电场中发生移动。 不同蛋白质分子所带电荷量不同，且分子大小也不同，故在电场中的移动速度也不同，据此可互相分离。;蛋白质颗粒的表面电荷和水化膜;蛋白质的热