HIV实验室质量管理.pptxVIP

艾滋病实验室质量管理实验室质量管理行政支持 行政部门和领导 HIV实验室建设和发展 资金 人员 监督支持人员培训 每年市疾控中心组织 上岗证环境条件：实验室的设置及其建筑、设施、设备必须符合《全国艾滋病检测工作管理办法》的要求。HCV，HBV及梅毒等血清学检测在满足实验室管理要求和保证生物安全的条件下，可以与HIV检测共享空间和设备，应避免交叉污染。实验室质量管理样品采集、运送和处理送检单收样登记表HIV抗体复检检测单检测方法和试剂的选择试剂的出入库及使用记录供应品、耗材（试剂）质量验收记录表实验室质量管理设备维护与校准仪器设备温度记录表仪器设备使用、检定、维修、维护记录本强检计量器具周期检定（自校）计划表文件和文件管理实验原始记录表结果报告样品登记和保存（唯一编码）实验室质量管理文件和文件管理标准操作程序（SOP）（1）样品的接收、登记、处理、保存和运输；（2）检测方法和步骤；（3）试剂使用和保存；（4）仪器的使用维护和校准；（5）质量控制要求及程序；（6）结果解释与报告；（7）保密程序；（8）实验室数据、相关文件记录与保存；（9）不确定样品追踪和处理；（10）实验室安全防护及实验室的清理和消毒。文件存档（保存10年以上）ELISA实验影响因素酶联免疫吸附实验（ELISA）的影响因素样品溶血标本及混有红细胞的血清采用ELISA法检测易产生假阳性? 可能是溶血血清中含有过氧化酶物质（红细胞或血红蛋白中的亚铁血红素），在洗涤过程中往往难以完全洗脱，它可使过氧化氢释放出原生态氧，从而催化底物四甲基联苯胺生成可溶性的有色物质，即显蓝色，产生假阳性。轻微溶血没事，严重溶血的标本易产生假阳性。受细菌污染的标本因菌体中可能含有内源性辣根过氧化物酶，因此，被细菌污染的标本同溶血标本一样，亦可产生非特异性显色而干扰测定结果。酶联免疫吸附实验（ELISA）的影响因素样品塑料试管能吸附抗原物质，样本久置在塑料管内会使样本内抗原含量下降造成假阴性?，最好使用真空采血管或抗凝管。（抗凝剂会略有影响，但影响不大）标本凝固不全 在工作中，有时为了争取时间快速检测，常在血液还未开始凝固时即强行离心分离血清，使血清中仍残留部分纤维蛋白原，在ELISA测定过程中可以形成肉眼可见的纤维蛋白块，易造成假阳性结果；因此血液标本采集后必须使其充分凝固后再分离血清。酶联免疫吸附实验（ELISA）的影响因素按说明书要求，实验前应取出试剂稳定加样加样的量要准确 移液器要经常清洗 定期校准加样位置 孔壁1/3以下 不可溅出 不可产生气泡必须使用一次性TIP头，严格控制，防止交叉污染先加稀释液的，加样时可用移液器孔内吹打混匀移液器的校准可以送检，可以自校，自校要有SOP有记录酶联免疫吸附实验（ELISA）的影响因素孵育时间 严格按照试剂盒说明书操作 容易控制温度 严格按照试剂盒说明书操作 用校准的温度计监测温度，特别是冬天，避免因温度过低导致假阴性。封板 孵育时不贴封片或加盖，使标本或稀释液蒸发，吸附于孔壁,难以清洗彻底。恒温孵育设备的使用与维护校准的温度计监测ELISA反应温度水浴的尤其要注意水位酶联免疫吸附实验（ELISA）的影响因素洗板洗液的量 试剂不同，板孔的大小差异会导致洗液的量的不同，为保证洗的彻底，原则是量足够多且不会逸出。浸泡时间 严格按照试剂盒说明书操作，一般30-60秒，不设置浸泡时间或时间太短，洗脱不彻底的话会产生“花板”。 保持针孔通畅不阻塞 血清中残留的的纤维蛋白丝或洗涤液析出的结晶易使洗板机的针孔处于阻塞状态，造成未结合标记酶洗脱不彻底，导致“花板”。应做好洗板机的维护工作。拍板酶联免疫吸附实验（ELISA）的影响因素洗板机的检定、使用及维护检定：注液量和残留量（每孔＜5微升）使用：设置程序（注液量、洗板次数、浸泡时间、洗板位置）维护：消毒液冲洗，蒸馏水冲洗酶联免疫吸附实验（ELISA）的影响因素显色加底物时，应悬空加液，避免触及板孔内壁造成交叉污染。应先加底物缓冲液A再加TMB(四甲基联苯胺)底物B，加入顺序不能颠倒。已显浅蓝色的TMB底物坚决不能用。个别试剂要求A、B液先混合后再加。温度与时间的控制。酶联免疫吸附实验（ELISA）的影响因素终止及读板读板前应保证板孔底部干净，无异物，无水气，无气泡，特别是在冬天。酶标仪不应放置在阳光或强光照射下,操作时室温宜在15-30℃,使用前先预热15-30 min,测读板结果会更稳定。酶标仪必须检定标准板厂家酶联免疫吸附实验（ELISA）的影响因素Cutoff值计算及结果判定注意事项严格按照试剂说明书要求的数量做阴、阳性对照根据阴、阳性对照的值判定实验是否成立严格按照试剂说明书要求计算Cutoff值注意空白原始记录标明空白对照、阳性对照、阴性对照、外部对照以及待检样品的位